Энтерол после еды или до еды или после: до еды или после?» – Яндекс.Кью

Штаммы S. boulardii , полученные из различных источников (дополнительная таблица S1) были охарактеризованы вместе с 23 штаммами S. cerevisiae , одним штаммом S. mikatae и одним штаммом S. paradoxus , используя полиморфизм длины амплифицированных фрагментов (AFLP) и анализ полногеномной последовательности.Все штаммы S. boulardii сформировали единый кластер высокородственных штаммов (дополнительный рисунок S1). Кроме того, этот кластер из штаммов S. boulardii был встроен в более крупный кластер S. cerevisiae , который был только отдаленно родственен двум другим видам Saccharomyces . Эти результаты подтвердили идентичность штаммов S. boulardii , использованных в этом исследовании, и подтвердили, что S. boulardii и S. cerevisiae настолько близки, что, вероятно, принадлежат к одному виду.

Оценка антимикробной активности

S. boulardii продуцирует уксусную кислоту на уровнях с антибактериальной активностью. ( A , B ) Анализ диффузии в лунках агара для оценки антибактериальной активности бесклеточного YPD с 2% супернатантами культуры глюкозы из штаммов S. boulardii ( левая панель ) и штаммов S. cerevisiae () правая панель ), что визуализировано с помощью планшетов, содержащих E. coli MG1655 в качестве индикаторного штамма и окрашивание клеток йодонитротетразолийхлоридом (INT).( C , D ) ВЭЖХ-хроматограммы супернатантов бесклеточных культур (красная линия) из Sb.P ( S. boulardii ) и ER ( S. cerevisiae ) по сравнению со стандартом 2% уксусной кислоты ( зеленая линия). Вставки : диффузионный анализ антибактериальной активности в агаре с использованием E. coli MG1655 в качестве индикаторного штамма. ( E ) Накопление уксусной кислоты как функция времени для S. boulardii дикого типа (Sb.P, Sb.A, 7136, 259, UL, SAN) (закрашенные символы) и S.cerevisiae (ATCC 38555, MUCL 28177, ER, VR-1, JT22689, CAT-1) (открытые символы). ( F ) Анализы роста пятен на твердой агаризованной среде YPD (2%) и YPAc (1%, pH 5) для штаммов S. boulardii , способных накапливать очень высокие уровни уксусной кислоты (Sb.P и Sb.A) по сравнению со штаммами с более низким и временным накоплением уксусной кислоты (Sb.L и ENT). SBERH6 представляет собой гибридный гаплоидный сегрегант, полученный из Sb.P и ER, с очень высокой способностью накапливать уксусную кислоту. Градиентный темный цвет на клине указывает на силу разведения культуры клеток перед нанесением пятен.

Идентификация антимикробного агента, секретируемого

Затем мы проанализировали влияние накопления уксусной кислоты на пролиферацию и жизнеспособность клеток S. boulardii . Три штамма S. boulardii (Sb.P, Sb.L и Энтерол) размножали вместе с одним штаммом S. cerevisiae (ER) при 37 ° C, и образцы культур отбирали с 12-часовыми интервалами. Концентрация уксусной кислоты, pH культуральной среды, прирост биомассы (измеренный с помощью OD ₆₀₀ ) и жизнеспособность клеток определялись в каждый момент времени (дополнительный рис.S3). Уровни уксусной кислоты, продуцируемые этими штаммами, подтвердили предыдущие результаты. Кроме того, накопление уксусной кислоты штаммом Sb.P тесно коррелировало с квазилинейным снижением pH среды в течение 72 часов примерно с 6 до 4,2. Напротив, pH среды для остальных штаммов снизился за 72 часа только примерно на 1 единицу pH, что обычно наблюдается для дрожжевых культур, выросших в стационарной фазе. Измерения биомассы и жизнеспособности клеток показали, что высокое накопление уксусной кислоты Sb.P подавлял собственную пролиферацию и ускорял гибель клеток. Когда было накоплено 2 г / л уксусной кислоты, Sb.P оставался метаболически активным, поскольку он продолжал продуцировать уксусную кислоту, но не размножался дальше. Гибель клеток наблюдалась при концентрации уксусной кислоты 5–6 г / л (дополнительный рис. S3A, D), что приводило для Sb.P к необычно низкой конечной жизнеспособности клеток, составляющей всего 20%. С другой стороны, штаммы Sb.L, Enterol и ER показали типичные кривые роста дрожжей, переходя в стационарную фазу через 36 ч (дополнительный рис.S3C) и поддержание почти 100% жизнеспособности клеток (дополнительный рис. S3D).

Получение компетентного к спариванию гаплоидного

RHA для идентификации причинного гена в QTL1. ( A ) Обзор диссекции QTL1 до разрешения уровня нуклеотидов. Разделение QTL1 на восемь блоков генов для bRHA и генов, присутствующих в блоке 6. Схема аллеля SDh2 SBERH6, изображающая два несинонимичных SNP в кодирующей области SDh2 и их результирующие аминокислотные замены в Sdh2. Причинная мутация показана красным. ( B ) Типичный пример bRHA секреции уксусной кислоты с парами диплоидных штаммов SBERH6 / S288c (SB / Sc) для блоков 3, 4, 5 и 6 (B3 – B6), что указывает на то, что блок 6 содержит один или больше причинных генов.( C ) Продукция уксусной кислоты как функция времени штаммами RHA с делецией блока 6, SBERH6 / S288c B6Δ (•) и SBERH6 B6Δ / S288c (▪) по сравнению с контрольными штаммами SB (SBERH6) (♦) , Sc (S288c) (○) и SBERH6 / S288c (SB / Sc) (□). ( D ) RHA с отдельными генами, присутствующими в блоке 6, идентифицируя SDh2 как причинный ген. ( E ) Продукция уксусной кислоты как функция времени штаммами RHA для гена SDh2 , SB / Sc sdh2Δ (SBERH6 / S288c sdh2Δ ) (▴) и SB sdh2Δ / Sc (SBERH2Δ / Sc sdh2Δ / S288c) (▾) по сравнению с контрольными штаммами Sb (SBERH6) (♦), Sc (S288c) (○) и SBERH6 / S288c (□).Результаты представляют собой средние значения трех биологических повторов для каждой временной точки. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение в каждый момент времени. Данные анализировали с помощью двустороннего дисперсионного анализа (тест множественных сравнений Тьюки). Значительные различия в накоплении уксусной кислоты между штаммами обозначены звездочками, (****) P <0,0001, (нс) незначительно.

Идентификация причинного аллеля в QTL1 на хромосоме XI

Шестнадцать открытых рамок считывания присутствовали в блоке 6 (A), из которых APE2, SDh2, AVT3, LTV1, SDh4 и TGL1 содержали по крайней мере одну ошибку. мутации или, в случае APE2 , мутации сдвига рамки считывания.Эти гены были отнесены к числу генов-кандидатов на RHA. Были сконструированы пары гемизиготных диплоидных штаммов SBERH6 / S288c для каждого гена и протестированы на продукцию уксусной кислоты. Штамм SBERH6 / S288c sdh2 Δ показал гораздо более высокую продукцию уксусной кислоты (выход 2,28 ± 0,75 г / л), чем SBERH6 sdh2 Δ / S288c, который продуцировал только 0,66 ± 0,05 г / л (D). Гемизиготные штаммы для других пяти генов не показали каких-либо значительных различий в продукции уксусной кислоты (D). Эксперимент с динамикой выработки уксусной кислоты показал, что SBERH6 / S288c sdh2 Δ ведет себя аналогично SBERH6 / S288c block6Δ , что согласуется с SDh2 , являющимся единственным причинным аллелем в блоке 6 (C, E).Максимальный уровень продукции уксусной кислоты 6,15 ± 1,04 г / л, достигнутый через 36 часов SBERH6 / S288c sdh2 Δ, был аналогичен таковому у высшего родительского штамма SBERH6 (E), в то время как штамм SBERH6 sdh2 Δ / S288c показал аналогичный, очень низкий уровень продукции уксусной кислоты (0,84 ± 0,02 г / л) (E), как наблюдалось для штамма SBERH6 block6Δ / S288c (C).

Анализ последовательности

Две точечные мутации были обнаружены в открытой рамке считывания SDh2 из SBERH6, который происходит из S.boulardii штамм Sb.P, имеющий с. [604C> T]; [950T> A], что приводит к замене двух аминокислот: p. [H302Y]; [F317Y]. Следовательно, мы назвали этот аллель sdh2 ^{h302Y, F317Y} . Последующий анализ последовательности показал, что такие же точечные мутации и аминокислотные замены также присутствовали в SDh2 в других 11 штаммах S. boulardii (A). Чтобы выяснить, присутствовали ли эти мутации SDh2 в штаммах S. cerevisiae и в других S.boulardii , мы проверили все опубликованные последовательности генома двух дрожжей на предмет их присутствия. Помимо 12 штаммов S. boulardii из этого исследования, общедоступные данные полногеномного секвенирования 992 уникальных штаммов (Strope et al. 2015; Peter et al. 2018) были сопоставлены с эталонной последовательностью S288c. Это включало 24 штамма с высоким сходством с S. boulardii , сгруппированные вместе в «субклад 3» Peter et al. (2018). Позиции с <85% считываний, указывающих на одно основание, считались гетерозиготными, и им присваивался вызов вырожденного основания в сопоставленных сборках.B показывает выравнивание для 18 штаммов S. cerevisiae в качестве примера. Этот анализ показал, что c.604C> T в SDh2 , заменяя гистидин ²⁰² на тирозин ²⁰² , также присутствует в некоторых штаммах S. cerevisiae . Однако c.950T> A, заменяющий фенилаланин ³¹⁷ на тирозин ³¹⁷ в Sdh2, присутствовал во всех 12 штаммах S. boulardii и во всех 24 штаммах, отнесенных Питером к подкладу S. boulardii . и другие.(2018). Из 968 дополнительных проанализированных штаммов S. cerevisiae эта мутация была идентифицирована только в штамме, наиболее близком к субкладу S. boulardii , ARL (дополнительный рисунок S10). C показывает выравнивание для двух дополнительных штаммов S. boulardii из Khatri et al. (2017) в качестве примера.

Сравнение последовательностей выбранных областей в Sdh2 из S. boulardii и S. cerevisiae и идентификация причинной мутации.( A ) Выравнивание аминокислотной последовательности Sdh2 в областях 181–206 и 313–321 штаммов S. boulardii и S. cerevisiae S288c. ( B ) Выравнивание соответствующей последовательности Sdh2 S. boulardii SBERH6 и 18 дополнительных штаммов S. cerevisiae . ( C ) Выравнивание соответствующей последовательности Sdh2 двух дополнительных штаммов S. boulardii . Два положения, 202 и 317, с аминокислотными заменами, показаны черными стрелками, а замещающие аминокислотные остатки — красным.( D ) Накопление уксусной кислоты как функция времени штаммами SBERH6 (•) и SBERH6 с заменой sdh2 на SDh2 ^{Y202H , Y317F} (□), SDh2 F ▴) или sdh2 ^Y202H (◊). ( E ) Накопление уксусной кислоты как функция времени штаммами Sb.P (•) и Sb.P с двумя копиями sdh2 , замененными на SDh2 ^{Y202H , Y317F} (▿) или sdh2Δ (□).Результаты представляют собой средние значения трех биологических повторов для каждой временной точки. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение в каждый момент времени.

Функциональное подтверждение причинного нуклеотида (ов)

RHA для идентификации причинного гена в QTL2. ( A ) Обзор диссекции QTL2 до разрешения уровня нуклеотидов. Разделение QTL2 на девять блоков генов для bRHA и генов, присутствующих в блоке 8. ( B ) Накопление уксусной кислоты штаммами bRHA для блока 8 и для WHI2 . Штаммы bRHA для блока 8 или WHI2 показаны как SB Block8Δ или SB whi2Δ и Sc Block8Δ или Sc whi2Δ для реципрокных делеций в геноме SBERH6 и S288c, соответственно, в SBERH6 / S288c sdh2 , F317Y фон.Штаммы: SBERH6 / S288c sdh2 ^{h302Y, F317Y} (□), SBERH6 / S288c sdh2 ^{h302Y, F317Y} B8∆ (▴), SBERH6 B8302 whi2Δ / S288c sdh2 ^{h302Y, F317Y} (▿) и SBERH6 / S288c sdh2 ^{h302Y, F317Y} whi2Δ (▵). ( C ) Накопление уксусной кислоты штаммами SBERH6 с модификациями WHI2 . Штаммы: SBERH6 (○), SBERH6 whi2Δ (▴), SBERH6 WHI2 -FL (WHI2 ^{* 287S} ) (▪) и SBERH6 WHI2 ^{аллель ) (▾).( D ) Накопление уксусной кислоты компанией Sb.P с двумя его копиями whi2 S287 * , замененными двумя копиями WHI2 Sc . Штаммы: Sb.P (•), Sb.P WHI2 Sc / WHI2 Sc (▪) и Sb.P whi2 287 * реинтегрирующий (○). Результаты представляют собой средние значения трех биологических повторов для каждой временной точки. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение в каждый момент времени. ( E ) Анализы роста пятен на твердом YPD (2%), YPAc (0.5%, pH 5) и YPAc (1%, pH 5) агаровой среды при 30 ° C и 37 ° C для S288c, Sb.P и Sb.P WHI2 Sc / WHI2 Sc . Градиентный темный цвет на клине указывает на силу разведения культуры клеток перед нанесением пятен.}

Идентификация уникального SNP

Открытая рамка считывания WHI2 из штамма SBERH6 содержала 12 SNP, из которых шесть были несинонимичными (). Одиннадцать из этих SNP также встречаются в WHI2 в некоторых из 992 S.cerevisiae (Strope et al., 2015; Peter et al., 2018). Один единственный SNP, нонсенс-мутация c.860C> G, которая генерирует преждевременный стоп-кодон (S287 *), не встречался ни в одном из штаммов S. cerevisiae , но присутствовал в 11 из 12 S. boulardii . штаммы, использованные в нашем исследовании (все, кроме штамма LSB; см. также ниже в разделе «Статус гетерозиготности»), а также во всех 24 штаммах, отнесенных Peter et al. к субкладу S. boulardii .(2018). В качестве примера мы показываем выравнивание последовательности WHI2 из 45 штаммов S. cerevisiae , показывая, что 11 из SNP также встречаются по крайней мере в одном из них (дополнительная таблица S2). Sb.P и Sb.A были гомозиготными по этому SNP (S287 *), тогда как все остальные штаммы S. boulardii были гетерозиготными, за исключением штамма CIT среди изолятов, проанализированных Peter et al. (2018), который был гомозиготным (см. Также ниже в разделе «Статус гетерозиготности»), а у одного штамма, LSB, полностью отсутствовал SNP, сохранив нуклеотид 860C S.cerevisiae (). Таким образом, мы идентифицировали новый уникальный SNP, который присутствует почти во всех штаммах S. boulardii и встречается в одной или двух копиях, возможно, причинно связанных с низкой или высокой способностью накопления уксусной кислоты, соответственно.

Таблица 1.

Встречаемость SNP в WHI2 для штаммов S288c, SBERH6 и 12 S. boulardii

Идентификация уникального SNP

Когда мутантный аллель WHI2 в SBERH6 был заменен аллелем WHI2 дикого типа из S288c, WHI2 ^Sc , наблюдалось временное накопление уксусной кислоты с максимумом через 36 часов в отличие от непрерывное накопление уксусной кислоты в штамме SBERH6 (C).Поскольку бессмысленная мутация c.860C> G в SBERH6 приводит к усеченному, возможно, неактивному белку, мы также удалили WHI2 в SBERH6. Штамм SBERH6 whi2 Δ ( whi2 :: NatMX4 ) действительно показал очень похожее накопление уксусной кислоты, как SBERH6 (C). Это предполагает, что причиной мутации может быть бессмысленная мутация c.860C> G в верхнем аллеле WHI2 . Чтобы оценить эту возможность, в SBERH6 был введен модифицированный аллель WHI2 , WHI2 -FL ( WHI2 ^{* 287S} ).Этот аллель содержал все SNP, присутствующие в промоторе, ORF и терминаторе WHI2 из SBERH6, за исключением нонсенс-мутации c.860C> G. Штамм SBERH6 WHI2- FL показал временное накопление уксусной кислоты, как SBERH6 WHI2 ^Sc (C), в то время как реинтеграция исходного мутантного аллеля whi2 ^SBERH6 восстанавливала непрерывное накопление уксусной кислоты (дополнительный рисунок S5). Это указывает на то, что мутация c.860C> G действительно является причинным SNP в аллеле whi2 SBERH6.

Важность числа копий

Мы подтвердили, что число копий whi2 ^{S287 *} отвечает за постоянное накопление высоких уровней уксусной кислоты в Sb. .P, путем обмена двух копий whi2 ^{S287 *} на его аналог из S288c, сгенерировав Sb.P WHI2 ^Sc / WHI2 ^Sc . Это привело к высокому профилю накопления уксусной кислоты Sb.P для перехода к более низкому и временному профилю накопления уксусной кислоты у других штаммов S. boulardii , в то время как реинтеграция исходного мутанта whi2 ^{S287 *} аллеля восстановила фенотип (D). Штамм Sb.P WHI2 ^Sc / WHI2 ^Sc также рос при 37 ° C на планшетах с YP-ацетатом (1%) (E). При более низкой концентрации ацетата (0,5%) дефект роста при 37 ° C, вызванный whi2 ^{S287 *} , был только частичным (E).

Затем мы исследовали, может ли фенотип Sb.P с очень высоким накоплением уксусной кислоты быть передан другим штаммам S. boulardii с более низким и временным продуцированием уксусной кислоты путем модификации аллеля WHI2 . С этой целью ген WHI2 был реципрокно удален в штамме S. boulardii 259, либо исключая верхний whi2 ^{S287 *} (кодирующий усеченный Whi2) или нижний аллель WHI2-FL ( кодирование полноразмерного Whi2).Штамм, в котором был удален только верхний аллель whi2 ^{S287 *} , 259 WHI2- FL / whi2- TΔ, сохранял более низкое и временное накопление уксусной кислоты, тогда как штамм, в котором нижний аллель WHI2- Аллель FL был удален, 259 whi2- FLΔ / whi2- T, накопил очень высокое накопление уксусной кислоты (A). Сопоставимые результаты были получены с другим штаммом S. boulardii с более низким и временным продуцированием уксусной кислоты, 7103 (B).В обоих штаммах, 259 и 7103, делеция аллеля whi2 ^{S287 *} вызвала дальнейшее снижение продукции уксусной кислоты, что указывает на то, что усеченный продукт гена whi2 ^{S287 *} может сохранять некоторую активность.

Подтверждение функциональной значимости WHI2 для уровня продукции уксусной кислоты у других штаммов S. boulardii . ( A ) Продукция уксусной кислоты в штамме 259 с единственной делецией полноразмерного аллеля WHI2 ( whi2 -FLΔ / whi2 -T) или мутантного аллеля whi2 ^{S287 *} ( WHI2 -FL / whi2 -TΔ).Штаммы: дикого типа 259 WHI2 -FL / whi2 -T (♦), 259 whi2 -FLΔ / whi2 -T () и 259 WHI2 -FL / whi2 -T (▿). ( B ) Продукция уксусной кислоты в штамме 7103 с единственной делецией полноразмерного аллеля WHI2 ( whi2 -FLΔ / whi2 -T) или мутантного аллеля whi2 ^{S287 *} ( WHI2 -FL / whi2 -TΔ). Штаммы: дикого типа 7103 WHI2 -FL / whi2 -T (○), 7103 whi2 -FLΔ / whi2 -T () и 7103 WHI2 -FL / whiΔ (♦).( C ) Продукция уксусной кислоты в штамме 7103 с двумя полноразмерными аллелями WHI2 ( WHI2 -FL), двумя мутантными аллелями whi2 ^{S287 *} ( whi2 -T) или двойной делецией обоих аллелей. Штаммы: 7103 WHI2 -FL / WHI2 -FL (•), 7103 whi2 -T / whi2 -T (▪) и 7103 whi2 -FLΔ / whi2 -TΔ ( . ( D ) Производство уксусной кислоты в S. cerevisiae S288c, содержащем причинные аллели sdh2 ^{h302Y, F317Y} ( sdh2 ^SBERH6 ) и / или (или SBERH6 ) из ​​ S.boulardii . Штаммы: SBERH6 (▴), S288c (▾), S288c sdh2 ^SBERH6 (□), S288c whi2 ^SBERH6 (▪), и S288c sdh2 ^{sdh2 ). Результаты представляют собой средние значения трех биологических повторов для каждой временной точки. Планки погрешностей показывают стандартное отклонение в каждый момент времени.}

Мы также сконструировали штаммы, которые были гомозиготными по аллелю WHI2- FL, кодирующему полноразмерный Whi2, 7103 WHI2- FL / WHI2- FL, или по лучшему whi2 ^{S287 *} , кодирующему усеченный аллель Whi2, 7103 whi2- T / whi2- T.Штамм 7103 whi2- T / whi2- T показал такое же очень высокое накопление уксусной кислоты, что и Sb.P. С другой стороны, штамм 7103 WHI2- FL / WHI2- FL поддерживал более низкое и временное накопление уксусной кислоты штамма 7103 (C). Эти результаты показывают, что замена превосходящего аллеля whi2 ^{S287 *} на нижний аллель WHI2- FL в штамме S. boulardii с более низким и временным продуцированием уксусной кислоты, что приводит к штамму с двумя whi2 ^{S287 *} аллелей, достаточно, чтобы превратить его в штамм с очень высоким накоплением уксусной кислоты.

Передача высокой способности накапливать уксусную кислоту у

Более высокие уровни сахара приводят к очень высокому накоплению уксусной кислоты во всех штаммах

Для скрининга антибактериальной активности в более крупном наборе из штаммов S. cerevisiae мы сначала оптимизировали анализ, чтобы мы могли обнаружить антибактериальную активность в S.boulardii с более низким временным накоплением уксусной кислоты. Повышение уровня глюкозы с 2% до 4% привело к аналогичной высокой антибактериальной активности (дополнительный рисунок S8A) и накоплению уксусной кислоты (дополнительный рисунок S8C по сравнению с S8D) у всех штаммов S. boulardii . Такая высокая антибактериальная активность (дополнительный рисунок S8B) и накопление уксусной кислоты (дополнительный рисунок S8C-E) не наблюдались в штаммах 304 S. cerevisiae , испытанных на оба свойства, хотя их меньшинство из S.cerevisiae также продуцировали промежуточные и некоторые даже более высокие уровни уксусной кислоты, приближающиеся к уровням, продуцируемым штаммом S. boulardii (дополнительный рисунок S8E). В качестве единственного исключения один мутантный лабораторный штамм гаплоида S. cerevisiae , полученный из M5, продуцировал уксусную кислоту, равную уровню S. boulardii .

Филогенетический анализ на основе анализа полногеномной последовательности всех

Мы построили дерево соединения соседей на основе анализа SNP полногенома после картирования данных секвенирования полногенома Illumina с использованием BioNumerics 7.6 (прикладная математика) 352 штаммов дрожжей, принадлежащих к Clade 1.Wine/European, а также 12 штаммов S. boulardii , согласно Peter et al. (2018) (дополнительный рисунок S9). 12 штаммов S. boulardii четко группируются вместе со штаммами Subclade 3, включая известные штаммы S. boulardii .Штамм ARL представляет собой штамм S. cerevisiae , наиболее близкий ко всем штаммам S. boulardii .

Статус гетерозиготности хромосомной области

Мы провели анализ статуса гетерозиготности 28 позиций SNP в области хромосомы XV в локусе WHI2 (дополнительный рис. S10). Штаммы Sb.P и Sb.A имеют потерю гетерозиготности в расширенной области, что приводит к гомозиготности по аллелю whi2 ^{S 287 *} , тогда как штамм CIT гомозиготен только по аллелю whi2 ^{S аллель 287 *} , а не для остальной части региона.Штаммы LSB и ARL имеют потерю гетерозиготности в этом положении, что приводит к гомозиготности по аллелю WHI2 дикого типа. Штамм Enterol является репрезентативным для всех 31 другого проанализированного штамма S. boulardii , демонстрируя гетерозиготность во всем регионе.

Обсуждение

S. boulardii — это пробиотические дрожжи, коммерциализированные во всем мире, с хорошо доказанной эффективностью в клинических испытаниях (Kotowska et al. 2005; McFarland 2006, 2010; Villar-García et al.2015). Остается неясным, почему и каким образом дрожжи S. boulardii будут оказывать специфический пробиотический эффект в отличие от дрожжей S. cerevisiae , которые настолько близки по последовательности генома, что теперь эти два вида считаются одним видом. С другой стороны, по-видимому, нет надежных сравнительных исследований пробиотической активности S. cerevisiae по сравнению с S. boulardii в клинических испытаниях. Таким образом, остается неясным, может ли S. boulardii обладать уникальными чертами по сравнению с S.cerevisiae , которые важны из-за его предполагаемой превосходной пробиотической активности.

Были случаи, когда коммерческие препараты пробиотиков не имели чистоты или содержали другие организмы, чем ожидалось (Fasoli et al. 2003; Theunissen et al. 2005; Huys et al. 2006). Кроме того, некоторые штаммы в нашей коллекции (Sb.A, Sb.L и Sb.P) были неизвестного происхождения (van der Aa Kühle et al. 2005). Таким образом, мы определили идентичность всех штаммов S. boulardii в нашей коллекции, используя AFLP (MacKenzie et al.2008) и анализ последовательности всего генома (дополнительная таблица S1). Это показало, что 12 штаммов S. boulardii были очень тесно связаны, образуя единый кластер на филогенетическом дереве (дополнительный рис. S1). Они были гораздо более близки ко всем штаммам S. cerevisiae , чем к S. mikatae и S. paradoxus , что является дополнительным доказательством того, что S. boulardii является аналогом S. cerevisiae (van der Aa Kühle и Jespersen 2003; Fietto et al.2004 г.).

Противомикробное действие за счет антимикробного пептида или секреции органических кислот считается ключевым пробиотическим свойством (Boirivant and Strober 2007; Vanderpool et al. 2008; Ciorba 2012). Сообщается, что S. boulardii секретирует жирные кислоты со средней длиной цепи, в основном каприновую кислоту, с биоактивностью против Candida albicans гиф и образования биопленок (Krasowska et al. 2009; Murzyn et al. 2010). Однако, насколько нам известно, секреция диффундирующих антимикробных агентов S.boulardii против бактериальных патогенов никогда не описывалось. Все протестированные штаммы S. boulardii секретировали антимикробный агент, оказывающий ингибирующее действие на E. coli MG1655, энтеральный бактериальный патоген. Мы идентифицировали его как уксусную кислоту, что объясняет сильное закисление среды до pH 4,2 при 37 ° C. Низкий pH является решающим фактором для того, чтобы органические кислоты с короткой цепью действовали как противомикробные агенты, поскольку доля протонированной незаряженной формы сильно увеличивается при значениях pH ниже pKa.Незаряженная форма легко диффундирует в клетки, вызывая аберрантное внутриклеточное закисление (Салмонд и др., 1984; Ламберт и Стратфорд, 1999; Такахаши и др., 1999). Способность Sb.P к подкислению среды путем секреции высоких уровней уксусной кислоты при 37 ° C предполагает, что он может поставить под угрозу метаболическую активность и пролиферацию кишечных патогенов в локальных микроокружениях на щеточной кайме в кишечнике. Хотя известно, что более высокая температура увеличивает продукцию уксусной кислоты S. cerevisiae (Woo et al.2014), производство таких высоких количеств уксусной кислоты (около 6 г / л), которые наблюдались в нашем исследовании для S. boulardii , никогда не сообщалось для S. cerevisiae . Накопление уксусной кислоты Sb.P было настолько высоким, что вызывало ингибирование его собственного роста и потерю жизнеспособности клеток (дополнительный рисунок S3C, D). Бесклеточный супернатант от других штаммов S. boulardii , которые не проявляли устойчивой продукции уксусной кислоты с течением времени, не ингибировал E.coli в условиях с исходным содержанием YPD и 2% глюкозы. То же самое наблюдалось для бесклеточного супернатанта из штаммов S. cerevisiae . Следовательно, сильная антимикробная активность супернатанта бесклеточной культуры Sb.P может быть объяснена высоким уровнем уксусной кислоты и низким pH. Последующая работа показала, что при более высоком уровне глюкозы все штаммы S. boulardii продуцируют очень высокие уровни уксусной кислоты, что приводит к очень высокой пробиотической активности.Это уникальное свойство сильного продуцирования уксусной кислоты может, по крайней мере, частично объяснять эффективность S. boulardii в качестве пробиотика в кишечнике, а также его уникальность как единственного сорта, выбранного для коммерческого использования в качестве пробиотика среди всех штаммов, которые в настоящее время считаются принадлежащими к виду S. cerevisiae .

Секреция уксусной кислоты S. boulardii в кишечнике может иметь другие преимущества для хозяина. Ацетат стимулирует рост и наращивание Т-регуляторных клеток, способствует пролиферации бокаловидных клеток и активирует гены, связанные с секрецией слизи, ингибирует провоспалительный цитокин CXCL8 и служит субстратом для производства бутирата микробиотой кишечника (Engevik and Versalovic 2017).Возможный контраргумент против предполагаемого преимущества может заключаться в том, что продукция уксусной кислоты S. boulardii в значительной степени ограничена аэробными условиями (дополнительный рис. S11), по крайней мере, в условиях нашего анализа. Однако неинвазивное измерение давления кислорода в желудочно-кишечном тракте выявило заметный градиент кислорода от проксимального к дистальному отделу желудочно-кишечного тракта (He et al., 1999), а также наличие радиального градиента с высокими уровнями O ₂ , близкими к поверхность эпителия и очень низкие уровни O ₂ в центре просвета кишечника (Albenberg et al.2014). Это говорит о том, что микроорганизмы, колонизирующие эпителий кишечника на щеточной кайме, обладают такой же доступностью кислорода, как и клетки эпителия. Кроме того, известно, что уровни доступности кислорода в желудочно-кишечном тракте значительно повышаются в условиях, нарушающих нормальную микробиоту кишечника, таких как лечение антибиотиками (Rivera-Chávez et al., 2016, 2017; Vacca, 2017) и энтеропатогенные инфекции (Rivera-Chávez et al. 2017). Это говорит о том, что кишечные расстройства, при которых эффективность S.boulardii , например, диарея, связанная с антибиотиками (McFarland et al. 1995; Duman et al. 2005), инфекция C. difficile (McFarland et al. 1994) и острая диарея взрослых (McFarland 2010), может обеспечивают подходящую аэробную среду для максимальной секреции уксусной кислоты S. boulardii .

Измерение динамики показало, что продукция уксусной кислоты штаммом Sb.P не подвергалась риску из-за ограничения роста. После остановки роста через 12 ч, по-видимому, из-за ингибирования накопленной уксусной кислотой, производство уксусной кислоты не ослабевает (дополнительный рис.S3A, C). Он прекратился только через 48 часов, вероятно, из-за снижения жизнеспособности клеток (дополнительный рис. S3A, D). Производство уксусной кислоты при отсутствии роста является значительным, поскольку пробиотик должен быть эффективным в месте своего действия (Schrezenmeir and de Vrese 2001; Hill et al. 2014), а в кишечнике не всегда может быть доступная среда для пролиферации клеток.

В первоначальном тесте только штаммы Sb.P и Sb.A показали антимикробную активность in vitro. Последующие работы, однако, показали, что все S.boulardii продуцируют уксусную кислоту, но другие штаммы способны ее потреблять, в отличие от Sb.P и Sb.A. В результате Sb.P и Sb.A накапливали гораздо больше уксусной кислоты, чем другие штаммы, что объясняет их гораздо большую антимикробную активность. Анализ способности к росту на ацетате штаммов Sb.P и Sb.A, а также производного Sb.P SBERH6 показал, что они не могут расти на ацетате специфически при 37 ° C, в отличие от других S. boulardii. штаммов, которые росли на ацетате как при 30 ° C, так и при 37 ° C.Следовательно, наличие двух копий аллеля whi2 ^{S287 *} , по-видимому, вызывает температурно-чувствительный дефект утилизации ацетата, приводящий к непрерывному, очень высокому накоплению уксусной кислоты, свойство, которое, возможно, очень важно для эффективности пробиотиков, которое только проявляется. при нормальной температуре тела.

Дефект споруляции S. boulardii был серьезным препятствием для любого генетического анализа. В настоящей работе мы обошли эту проблему, удалив первые две копии гена HO в S.boulardii , чтобы сделать его гетероталлическим, мы затем сделали его гомозиготным по типу спаривания и скрестили этот штамм со штаммом S. cerevisiae , гомозиготным по комплементарному типу спаривания, чтобы получить гибридный гетероталлический штамм. Этот штамм был способен спорулировать, что позволило нам создать компетентный к спариванию гаплоидный гибридный штамм SBERH6, демонстрирующий такую ​​же высокую способность к накоплению уксусной кислоты, что и Sb.P. Эта инновационная стратегия обеспечивает эффективные средства, с помощью которых гаплоидные штаммы с конкретным интересующим признаком могут быть получены из диплоида или полиплоида S.cerevisiae штаммов. Это делает возможным последующий генетический анализ интересующего признака при условии, что гаплоидный штамм может быть скрещен с неродственным штаммом для получения диплоидного штамма, способного к споруляции. Так было в случае с SBERH6, так что мы могли затем применить платформу полигенного анализа, основанную на анализе объединенной сегрегантной последовательности всего генома. Теперь это успешно используется для выяснения полигенной основы многих признаков у S. cerevisiae (Liti and Louis 2012; Swinnen et al.2012; Hubmann et al. 2013; Pais et al. 2013; Ян и др. 2013; Meijnen et al. 2016; Trindade de Carvalho et al. 2017). 549 сегрегантов, полученных нами из гибридного диплоида SBERH6 / S288c, показали распределение продукции уксусной кислоты, напоминающее бимодальное распределение, хотя значительное количество сегрегантов показало промежуточный фенотип. Это распределение согласуется с низким числом вовлеченных генов-причинителей. Последующие работы показали, что наличие двух экземпляров sdh2 ^{h302Y, F317Y} всего S.boulardii важен для значительного производства уксусной кислоты, намного выше, чем у S. cerevisiae , в то время как присутствие whi2 ^{S287 *} в одной или двух копиях определяет разницу между кратковременным и умеренным по сравнению с непрерывным и высоким. накопление уксусной кислоты. Следовательно, взаимодействие между аллелями SDh2 и WHI2 , по-видимому, отвечает за общую форму кривой распределения сегрегантов и расхождение между разными S.boulardii штаммов. Таким образом, очень высокая способность накапливать уксусную кислоту является полигенным признаком, обусловленным двумя основными генетическими элементами, а небольшая вариация, наблюдаемая у сегрегантов, вероятно, связана с неизвестным количеством второстепенных генетических элементов.

SDh2 кодирует флавопротеиновую субъединицу комплекса сукцинатдегидрогеназы, которая функционирует в цикле трикарбоновой кислоты (TCA) и дыхательной цепи митохондрий, связывая окисление янтарной кислоты с переносом электронов на убихинон (Chapman et al.1992; Kim et al. 2012). Известно, что делеция SDh2 или других генов, кодирующих субъединицы комплекса сукцинатдегидрогеназы, вызывает более высокую продукцию уксусной кислоты у S. cerevisiae (Romano and Kolter 2005; Szeto et al.2010; Yoshida and Yokoyama 2012). Уксусная кислота секретировалась штаммом BY4741 sdh2 Δ при 30 ° C, давая 60 мМ (3,6 г / л) через 72 часа (Romano and Kolter 2005; Szeto et al.2010; Yoshida and Yokoyama 2012). В нашей работе Sb.P не обнаружил какого-либо перепроизводства уксусной кислоты при 30 ° C, но через 72 часа вырабатывал около 6 г / л при 37 ° C.Следовательно, аллель sdh2 ^{h302Y, F317Y} , который необходим для высокого образования уксусной кислоты при 37 ° C, на самом деле может быть термочувствительным аллелем, вызывающим сбои в работе комплекса сукцинатдегидрогеназы при 37 ° C.

Связь между дефектной сукцинатдегидрогеназой и высоким образованием уксусной кислоты может возникать по-разному. Дефект Sdh может поставить под угрозу окисление янтарной кислоты до фумаровой кислоты, вызывая нехватку щавелевоуксусной кислоты и, таким образом, снижая инициирование цикла TCA.Это может привести к накоплению ацетил-КоА и, в результате дальнейшего превращения митохондриальной ацетил-КоА-гидролазой (Buu et al. 2003), привести к образованию уксусной кислоты. С другой стороны, пируват может накапливаться из-за нарушенного цикла TCA, что приводит к более высоким уровням цитозольного ацетальдегида и, за счет преобразования альдегиддегидрогеназой, к более высоким уровням уксусной кислоты.

WHI2 кодирует белок с активностью активатора фосфатазы, который образует комплекс с фосфатазой Psr1 плазматической мембраны и локализуется на периферии клетки.Он участвует во многих процессах, включая регуляцию клеточного цикла, пролиферацию клеток, общую реакцию на стресс, эндоцитоз, организацию актинового цитоскелета и определение аминокислот (Saul and Sudbery 1985; Radcliffe et al. 1997; Chen et al. 2018; Teng and Hardwick 2019). Whi2 необходим для полной активации STRE-опосредованной экспрессии гена посредством дефосфорилирования фактора транскрипции Msn2 (Kaida et al. 2002), что важно для правильной деградации неправильно свернутых белков (Comyn et al.2017). Было показано, что сверхэкспрессия Whi2 улучшает устойчивость к уксусной кислоте, в то время как его отсутствие снижает ее (Chen et al. 2016). Хотя штамм whi2Δ демонстрирует множество других дефектов, связь с производством уксусной кислоты не является прямой. С другой стороны, поскольку причинный аллель whi2 ^{S287 *} содержит преждевременный стоп-кодон, его действие может быть аналогично действию делеции WHI2 . Следовательно, повышенная чувствительность Sb.P и Sb. К уксусной кислоте.A, имеющий две копии whi2 ^{S287 *} , может объяснить их неспособность потреблять накопленные высокие уровни уксусной кислоты в отличие от других штаммов S. boulardii только с одним аллелем whi2 ^{S287 *} . Важным наблюдением в этом отношении было то, что штаммы с двумя копиями whi2 ^{S287 *} были способны расти при более низких уровнях уксусной кислоты при 37 ° C (E), показывая, что они не испытывали недостатка в ассимиляции уксусной кислоты в течение se.Им не хватало только большого количества уксусной кислоты при 37 ° C, возможно, из-за их пониженной толерантности к уксусной кислоте. Следовательно, аллель whi2 ^{S287 *} может действовать опосредованно через ингибирование его потребления уксусной кислотой, что приводит к более высокому конечному уровню накопления уксусной кислоты. Это объяснение также подразумевает, что ни одна из двух причинных мутаций не должна быть чувствительной к температуре. Вместо этого дрожжи могут быть просто более чувствительными к уксусной кислоте при высокой температуре из-за мутации whi2 ^{S287 *} .Более высокая чувствительность Sb.P и Sb.A к уксусной кислоте также может способствовать их ранней остановке роста, позволяя направлять больше углерода на производство уксусной кислоты, а не на образование биомассы. Вторичные миссенс-мутации были зарегистрированы в локусе WHI2 штаммов из коллекции делеций дрожжей (Mendl et al. 2011; van Leeuwen et al. 2016; Comyn et al. 2017). Удаление STE20 , NUC1 , APM2 , OTU2 , GCN20 , SET2 , URA1 и SGN1 связано с повышенной частотой Teng и бессмысленных мутаций ( al.2013). Мы не смогли найти никаких очевидных вредоносных или бессмысленных SNP в этих генах у S. boulardii Sb.P, но это не исключает, что миссенс-SNP в одном из этих генов привел к появлению SNP c.860C> G в WHI2 .

Идентификация причинных SNP в SDh2 и WHI2 выявила по одному SNP в каждом, c. [950T> A] переводится в p. [F317Y] и c.860C> G переводится в p.S287Ter, соответственно, что были уникальными для S.boulardii и отсутствует практически во всех секвенированных штаммах S. cerevisiae . Таким образом, наша работа определила первую генетическую подпись для S . boulardii , который настолько близок по последовательности генома к S. cerevisiae , что оба считаются принадлежащими к одному виду. Эта уникальная генетическая подпись впервые обеспечивает простой способ идентифицировать новые штаммы S. boulardii , изолированные от природы. Все доступные в настоящее время штаммы S. boulardii , вероятно, происходят от исходных штаммов, выделенных Буларом.Более того, уникальные полиморфизмы в S. boulardii ответственны за заметное физиологическое различие — высокое производство уксусной кислоты, — которое из-за его антимикробной активности могло дать преимущество S. boulardii в определенных аэробных экологических нишах. Из-за его гораздо более высокой токсичности по сравнению с этанолом производство уксусной кислоты было бы выгодным в средах с более низкими концентрациями сахара, в которых могут накапливаться только низкие, нетоксичные уровни этанола.Это также могло быть причиной того, что S. boulardii был выбран и успешно использован во всем мире в качестве пробиотика. Если способность продуцировать уксусную кислоту важна для ее пробиотической активности, наша работа открывает возможности для отбора, разведения или конструирования штаммов S. boulardii с дальнейшим улучшением пробиотической активности или даже для передачи этого признака антимикробной активности на S .cerevisiae штаммов.

Однако введение превосходных аллелей sdh2 ^{h302Y, F317Y} и whi2 ^{S287 *} в S288c привело только к примерно 50% очень высокого накопления уксусной кислоты, наблюдаемого в Sb.P и Sb.A (D). Это может быть связано с полигенной природой признака и, следовательно, с необходимостью наличия дополнительных причинных генов в минорных QTL. Одна из возможностей заключается в том, что минорные QTL несут в себе избыточные причинные гены, один из которых должен функционировать кооперативно с причинным аллелем SDh2 из Sb.P. Другая возможность состоит в том, что один из основных QTL, QTL1 или QTL2, содержит другой второстепенный причинный аллель. Также возможны комбинации этих двух возможностей. Поскольку лабораторные штаммы дрожжей, такие как S288c, несут множественные изнуряющие мутации, которые отсутствуют в природных и промышленных S.cerevisiae , один из них может нарушить максимальную способность продукции уксусной кислоты и, следовательно, должен быть дополнен соответствующим геном дикого типа из S. boulardii .

В заключение, мы обнаружили новую специфическую черту дрожжей S. boulardii , высокую продукцию уксусной кислоты, которая может иметь большое значение для его пробиотической активности. Мы выяснили полигенную основу этого свойства и объяснили количественную разницу в производстве уксусной кислоты между S.boulardii штаммов. Этот новый признак обусловлен двумя специфическими точечными мутациями, которые уникальны для S. boulardii и обеспечивают первую специфическую генетическую сигнатуру для S. boulardii по сравнению с S. cerevisiae . Наша работа дает возможное объяснение выбора S. boulardii в качестве единственных пробиотических дрожжей в отличие от очень близкородственных, вероятно, конспецифических штаммов S. cerevisiae .

Методы

Штаммы, использованные в этой работе, перечислены в дополнительной таблице S1.Среда и условия культивирования, общие методы молекулярной биологии, случайное выделение спор и подготовка ДНК для определения полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (AFLP) подробно описаны в дополнительных методах.

Условия культивирования дрожжей для анализа продукции антимикробных препаратов и уксусной кислоты

Ночные прекультуры дрожжей доводили до OD ₆₀₀ 0,2 ​​в 50 мл YPD (с 2% глюкозы) в колбе Эрленмейера на 300 мл. Колбы инкубировали при встряхивании при 200 об / мин и 37 ° C в инкубаторе со встряхиванием в течение 48 часов.Для получения супернатантов бесклеточных культур аликвоты дрожжевых культур отбирали из колб и центрифугировали при максимальной скорости (14000 об / мин) в течение 5 мин. Супернатанты использовали для анализов диффузии в лунках агара или подвергали ВЭЖХ для определения концентраций уксусной кислоты. Для измерения динамики времени образцы отбирали из культур каждые 12 ч для дальнейшего анализа.

Анализ диффузии в лунках с агаром

Для анализов диффузии в лунках с агаром 25 мл расплавленного мягкого агара Мюллера-Хинтона (7.5 г бактоагара / л бульона Мюллера-Хинтона) инокулировали 5 × 10 ⁴ клеток / мл индикаторным штаммом E. coli . После этого добавляли индикатор роста бактерий, хлорид йодонитротетразолия (в 50% метаноле) до конечной концентрации 0,2 мг / мл и кратковременно встряхивали. Затем квадратную чашку Петри, содержащую 80 мл затвердевшего агара Мюллера-Хинтона, покрывали расплавленным верхним агаром. Верхнему агару давали возможность затвердеть, после чего девять лунок (в формате 3 × 3) пробивали в оба слоя агара, используя 12-миллиметровый стерильный пробоотборник.Полученные диски с агаром осторожно извлекали из каждой лунки парой стерильных щипцов и выбрасывали. Затем каждую лунку заполняли ~ 700 мкл супернатанта дрожжевой культуры. Все агаровые планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 12–18 часов.

Анализы роста с помощью серий точечных разведений для оценки способности использования ацетата

Штаммы размножали в 3 мл бульона YPD при 30 ° C в течение 1 дня. Разбавление каждой культуры готовили в стерильной воде Milli-Q до OD ₆₀₀ 0.5. Серия 5-мкл 10-кратных разведений (10 ⁰ -10 ^-5 ) каждого штамма была нанесена на YPD, а также на пептон дрожжевого экстракта + 1% ацетат калия (YPAc; pH 5). И планшеты YPD, и YPAc инкубировали при 30 ° C и 37 ° C.

ВЭЖХ-определение уксусной кислоты, определение плоидности дрожжей с помощью проточной цитометрии и определение жизнеспособности дрожжей выполняли, как подробно описано в дополнительных методах.

Делеция гена эндонуклеазы

Для RHA отдельных генов в QTL1, точная ORF левой и правой фланкирующих последовательностей и приоритетных генов в QTL1 ( APE2 , SDh2 , , AVT LTV1 , SDh4 и TGL1 ) были удалены с помощью KanMX4 .Методология, используемая для конструирования кассет и трансформации штаммов, такая же, как описано выше для bRHA. Несущественные гены APE2 , SDh2 , AVT3 , LTV1 и TGL1 были удалены в гаплоидном фоне SBERH6 и S288c. Успешные трансформанты оценивали на предмет правильной интеграции кассеты в каждом локусе с помощью ПЦР. Трансформанты S288c с правильной интеграцией в каждом локусе впоследствии скрещивали с SBERH6 и наоборот для получения реципрокных гемизиготных штаммов для каждого гена.Единственный важный ген, SDh4 , был удален в диплоидном фоне гибрида (SBERH6 / S288c). Успешные трансформанты, несущие делецию SDh4 в одной родительской хромосоме, были генотипированы с помощью аллель-специфической ПЦР.

Анализ реципрокной гемизиготности QTL2

Для RHA QTL2 весь блок (bRHA) или точная ORF была удалена с помощью NatMX4 в диплоидном штамме SBERH6 / S288c sdh2 ^{h302Y, FF. Маркер амплифицировали из плазмиды pTOPO-G1- NatMX4 -G1 с праймерами, содержащими хвосты длиной 50 п.н., гомологичные областям, фланкирующим целевой локус, как описано Baudin et al.(1993). Правильная интеграция маркера была подтверждена с помощью ПЦР, а оставшийся неделированный аллель был идентифицирован с помощью аллель-специфической ПЦР.}

Генотипирование с помощью аллель-специфической ПЦР и сайт-направленная генетическая модификация с использованием технологии CRISPR / Cas9 выполнялись, как описано в дополнительных методах.

Эффективность и безопасность пробиотика Saccharomyces boulardii для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний

Therap Adv Gastroenterol. 2012 Март; 5 (2): 111–125.

Департамент медицины, Отделение инфекционных заболеваний, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе, Калифорния, США

Центр воспалительных заболеваний кишечника, Div. по заболеваниям пищеварительной системы, Медицинская школа Дэвида Геффена, Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе, Калифорния

Abstract

Несколько клинических испытаний и экспериментальных исследований убедительно указывают на то, что Saccharomyces boulardii можно использовать в качестве биотерапевтического средства для профилактики и лечения ряда желудочно-кишечных заболеваний. S. boulardii опосредует ответы, напоминающие защитные эффекты нормальной здоровой кишечной флоры. Множественные механизмы действия S. boulardii и его свойства могут объяснить его эффективность и положительные эффекты при острых и хронических желудочно-кишечных заболеваниях, которые были подтверждены клиническими испытаниями. Следует соблюдать осторожность у пациентов с факторами риска нежелательных явлений. В этом обзоре обсуждаются доказательства эффективности и безопасности S. boulardii в качестве пробиотика для профилактики и лечения желудочно-кишечных расстройств у людей.

Ключевые слова: эффективность, желудочно-кишечные расстройства, пробиотик, Saccharomyces boulardii, безопасность

Введение

Появляется все больше свидетельств того, что микрофлора желудочно-кишечного тракта является основным регулятором иммунной системы не только в кишечнике, но и в других органах. [Gareau et al . 2010]. Непатогенные дрожжи Saccharomyces boulardii прописывались в течение последних 30 лет для профилактики и лечения диарейных заболеваний, вызванных бактериями.Важно отметить, что S. boulardii продемонстрировал клиническую и экспериментальную эффективность при желудочно-кишечных заболеваниях с преобладающим воспалительным компонентом, что указывает на то, что этот пробиотик может мешать клеточным сигнальным путям, обычным при многих воспалительных состояниях. Целью данного исследования является обзор клинических доказательств эффективности и безопасности S. boulardii в профилактике и лечении желудочно-кишечных расстройств различной этиологии.

Все большее число потенциальных преимуществ для здоровья приписывается лечению пробиотиками [Gareau et al .2010; Szajewska и др. . 2006]. Однако только ограниченное число было подтверждено в хорошо спланированных и проведенных рандомизированных контролируемых исследованиях (РКИ) и еще меньше — в педиатрической популяции. S. boulardii — это живые дрожжи, которые широко используются в качестве пробиотиков и часто продаются как пищевая добавка [McFarland, 2010]. Было идентифицировано несколько механизмов действия, направленных против хозяина, а также патогенных микроорганизмов, и включают регулирование микробного гомеостаза кишечника, вмешательство в способность патогенов колонизировать и инфицировать слизистую оболочку, модуляцию местных и системных иммунных ответов, стабилизацию желудочно-кишечного барьера. функции и индукции ферментативной активности, способствующей всасыванию и питанию (и) [Czerucka et al .2007; Им и Поулакис, 2010; Pothoulakis, 2009].

Таблица 1.

Механизмы действия Saccharomyces boulardii .

Таблица 2.

Механизмы действия Saccharomyces boulardii при специфических инфекциях.

91 и др. 1994]

Множественные профилактические и терапевтические эффекты этих пробиотических дрожжей при воспалительных заболеваниях желудочно-кишечного тракта подчеркивают эффективность S.boulardii при кишечных заболеваниях. Эта эффективность в профилактике и лечении острых и хронических желудочно-кишечных заболеваний определяется многими факторами () и оценивалась в нескольких клинических исследованиях ().

Таблица 3.

Свойства Saccharomyces boulardii , которые могут определять эффективность S. boulardii .

Таблица 4.

Клиническая эффективность Saccharomyces boulardii при острых и хронических заболеваниях.

Факторы, определяющие эффективность

Эффективность S.boulardii в качестве пробиотика включает множество факторов, включая внутренние свойства дрожжей (), их фармакокинетику (), вариации продукта и продукта, а также стабильность, количество штаммов, используемых в препарате пробиотика, и дозу используемого пробиотика.

Существует много различных продуктов Saccharomyces, имеющихся в продаже как пробиотики, и S. boulardii обычно доступен в капсулах с лиофилизированными или высушенными нагреванием препаратами [McFarland, 2010]. Выбор высококачественного пробиотического продукта — один из наиболее важных факторов, определяющих эффективность пробиотика.Качество этих продуктов из разных источников может различаться, и многие из коммерчески доступных продуктов могут не иметь регулируемых программ контроля качества [Marcobal et al . 2008; Мартинс и др. . 2005; Маско и др. . 2005; Weese, 2003]. Даже если на этикетке указано, что он содержит S. boulardii , изменение эффективности может произойти из-за более низкой, чем заявленная, дозы или неточного состава штамма [Martins et al . 2009]. Выбор высококачественных пробиотических продуктов может быть затруднен без доступа к специальным тестам контроля качества для коммерчески доступных пробиотических продуктов.Выбор продуктов от компаний, спонсирующих оригинальные клинические испытания, может указывать на более высокую степень приверженности высококачественным продуктам [McFarland, 2010].

Стабильность пробиотического продукта может значительно повлиять на его эффективность с течением времени. Лиофилизированные продукты стабильны при комнатной температуре, обладают преимуществом портативности и поддерживают высокий уровень жизнеспособности в течение продолжительных периодов времени [Graff et al . 2008а]. Высушенные при нагревании препараты необходимо хранить в холодильнике, и они могут быть нестабильными при комнатной температуре [McFarland, 2010].Исследование продуктов S. boulardii показало, что лиофилизированный продукт превосходит три убитых нагреванием препарата S. boulardii с точки зрения фармакокинетики и большего количества жизнеспособных клеток [Schwenzer, 1998].

Во всех РКИ с использованием S. boulardii использовался препарат из одного штамма. Хотя смеси пробиотиков, содержащие S. boulardii , доступны на рынке, не было проведено РКИ, показывающих, что эти смеси превосходят препараты из одного штамма.Доклинические исследования на животных моделях показали многообещающие результаты в пробиотических смесях, содержащих S. boulardii [Bisson et al . 2010]. Однако возможный антагонизм между различными пробиотиками может ослаблять терапевтический ответ пробиотических штаммов [Kajander et al . 2008].

Наконец, использованная доза S. boulardii также может повлиять на эффективность этого пробиотика [McFarland, 2010]. Различные дозы S. boulardii , использованные в разных исследованиях, могут объяснить некоторые расхождения в эффективности и результатах между этими исследованиями.К сожалению, использованная доза S. boulardii не всегда сообщается во всех исследованиях, в то время как в других исследованиях использованная доза указывается неоднородно между разными исследованиями (например, количество организмов на 100 мл или количество организмов в день или колониеобразующие единицы [ КОЕ] в день или граммов в день) [McFarland, 2010]. Эта неоднородность ограничивает метаанализы и дальнейший анализ влияния дозы S. boulardii на ее эффективность.

Клиническая эффективность

S.boulardii был протестирован на клиническую эффективность при нескольких типах острых желудочно-кишечных состояний, включая антибиотико-ассоциированную диарею (AAD), инфекцию, вызванную Clostridium difficile (CDI), острую диарею, диарею, связанную с энтеральным питанием, диарею путешественников и Helicobacter . инфекционное заболевание.

Диарея, связанная с антибиотиками

AAD определяется как диарея, не имеющая другого объяснения, которая возникает в связи с приемом антибиотиков [Bartlett, 2002].Меры по предотвращению AAD включают использование пробиотиков. Из 10 контролируемых испытаний на взрослых с использованием S. boulardii для профилактики AAD 8 (80%) показали значительную эффективность для предотвращения AAD [McFarland, 2010]. Защитный эффект S. boulardii и значительное относительное снижение ААД по сравнению с контролем находились в диапазоне от 7,4% до 25% [McFarland, 2010]. В других исследованиях не удалось продемонстрировать значительный защитный эффект S. boulardii , и это может быть вторичным по отношению к короткому или отсутствию последующего наблюдения после воздействия антибиотика [McFarland, 2009].В двух РКИ оценивалась способность S. boulardii предотвращать AAD у детей, а относительное значимое увеличение профилактики AAD в группе S. boulardii по сравнению с контролем варьировалось от 7,6% до 30,1% [Can et al . 2006; Kotowska и др. . 2005].

Недавний метаанализ 10 рандомизированных контролируемых исследований у взрослых показал, что S. boulardii значительно защищает от ААД с объединенным относительным риском (ОР) 0.47 (95% доверительный интервал [ДИ] 0,35–0,63, p <0,001) [McFarland, 2010]. Наконец, в другом метаанализе пяти испытаний с участием 1076 субъектов был обнаружен значительный защитный эффект S. boulardii (объединенный RR = 0,43, 95% ДИ 0,23–0,78) [Szajewska and Mrukowicz, 2005]. Однако, хотя многие метаанализы пришли к выводу, что пробиотики эффективны для предотвращения ААД [McFarland, 2009], большинство метаанализов пробиотиков сосредоточено на одном типе показаний к болезни (например.грамм. диарея, связанная с антибиотиками) с различными штаммами пробиотиков. Таким образом, мы обобщили данные метаанализов, которые сосредоточены только на использовании S. boulardii для предотвращения ААД, и пришли к выводу, что этот пробиотик эффективен при этом показании.

Инфекция Clostridium difficile

Пробиотики представляют собой многообещающий подход в качестве дополнительной терапии ИКД. Метаанализ шести РКИ различных пробиотиков, включая S. boulardii , показал, что пробиотики обладают значительной эффективностью для предотвращения последующих рецидивов ИКД (ОР = 0.59, 95% ДИ 0,41–0,85, p = 0,005) [McFarland, 2006]. Однако из-за ограниченного количества испытаний для одного пробиотического штамма не проводился метаанализ.

Некоторые данные свидетельствуют о том, что S. boulardii представляет собой наиболее эффективный пробиотик, который может предотвращать или вместе с другими агентами лечить антибиотико-ассоциированную диарею и рецидивирующую ИКД [McFarland, 2006] с помощью многих механизмов ().

Животные модели ИКД реагируют на этот дрожжевой грибок, а также сообщения о случаях или небольших сериях пациентов с рецидивирующей ИКД, получавших S.boulardii показали улучшение [McFarland, 2010].

Значительное относительное снижение рецидивирующей ИКД у взрослых, принимающих S. boulardii , по сравнению с контролем было оценено в двух РКИ и колебалось от 19% до 33,3% [McFarland et al . 1994; Суравич и др. . 2000]. Имеются очень ограниченные данные одного небольшого обсервационного исследования с участием детей, предполагающие, что S. boulardii может быть эффективным при ИКД [Buts et al . 1993].Однако, согласно руководящим принципам, не существует убедительных доказательств в поддержку рутинного использования пробиотиков для профилактики или лечения ИКД [Cohen et al . 2010], тем более что некоторые из этих исследований не контролировали дозу или продолжительность приема ванкомицина или метронидазола для лечения ИКД [McFarland et al . 1994] и поскольку существует немногочисленные данные об использовании S. boulardii для рецидивирующей ИКД у людей.

Острая диарея

Два РКИ с использованием S.boulardii показали, что этот пробиотик может быть эффективным при лечении острой диареи у взрослых, вызванной множеством причин, и может значительно снизить степень тяжести диареи по сравнению с контрольной группой [Hochter et al . 1990; Mansour-Ghanaei и др. . 2003]. К сожалению, поскольку количество испытаний в этой области невелико, а этиология в двух испытаниях была различной, можно сделать лишь ограниченные выводы.

Недавнее РКИ, проведенное с участием 100 госпитализированных детей, показало, что S.boulardii в течение 5 дней значительно сокращает среднюю продолжительность острой диареи и частоту стула, а также нормализует консистенцию стула [Htwe et al . 2008]. В одном РКИ, посвященном эффективности S. boulardii для профилактики острой диареи, участвовало 100 детей с острой водянистой диареей, и сообщалось о значительном различии в частоте эпизодов диареи в группе, получавшей S. boulardii , по сравнению с контрольной группой во время лечения. Наблюдение через 2 месяца [Billoo et al .2006].

Метаанализ, основанный на 5 РКИ (619 участников) [Billoo et al . 2006; Куруголь, Котуроглу, 2005; Вильярруэль и др. . 2007] показали, что S. boulardii значительно снижает продолжительность острой детской диареи и риск продолжительной диареи по сравнению с контролем [Szajewska et al . 2007]. Метаанализ семи РКИ (944 участника) показал сокращение продолжительности острой детской диареи примерно на 1 день у пациентов, получавших S.boulardii по сравнению с плацебо [Szajewska and Skorka, 2009]. Отсутствие ослепления, а также другие факторы, такие как амбулаторная помощь, могут объяснить, почему S. boulardii не оказал никакого эффекта в европейском РКИ [Canani et al . 2007]. Таким образом, результаты РКИ и руководств профессиональных педиатрических обществ показывают, что S. boulardii может быть эффективной дополнительной терапией при лечении острого гастроэнтерита у детей [Guarino et al . 2008].

Стойкая диарея

Результаты двух клинических испытаний показывают, что S.boulardii улучшает результаты у детей с постоянной диареей [Castaneda et al . 1995; Gaon и др. . 2003]. Относительно значимое снижение стойкой диареи в группе S. boulardii по сравнению с контролем составило примерно 50% [Castaneda et al . 1995]. Эти результаты показывают, что S. boulardii полезен при лечении стойкой диареи у детей. Однако необходимы исследования с более крупными популяциями, чтобы определить, действительно ли S.boulardii сама по себе также эффективна у детей с постоянной диареей.

Диарея, связанная с энтеральным питанием

Диарея представляет собой серьезную проблему для пациентов, получающих полное энтеральное питание (TEN), и может включать изменения в кишечных короткоцепочечных жирных кислотах (SCFAs) [Schneider et al . 2005]. Schneider и его коллеги сообщили о значительном увеличении SCFAs у 10 пациентов, получавших энтеральное питание и получавших S. boulardii , по сравнению с 15 здоровыми людьми из контрольной группы [Schneider et al .2005]. S. boulardii -индуцированное увеличение концентраций SCFA в кале может объяснить профилактическое действие этих дрожжей на TEN-индуцированную диарею [Schneider et al . 2005]. В трех РКИ относительное значимое снижение диареи, связанной с энтеральным питанием, в группе S. boulardii по сравнению с контролем составляло от 5% до 8,2% [Bleichner et al . 1997; Шлоттерер и др. . 1987; Tempe и др. . 1983]. Необходимы дополнительные исследования, чтобы выяснить механизмы того, как S.boulardii может предотвратить диарею, вызванную TEN.

Диарея путешественников

Мета-анализ 12 РКИ различных пробиотиков (включая S. boulardii ) для профилактики диареи путешественников обнаружил значительное снижение риска диареи путешественников при использовании пробиотиков (RR = 0,85, 95 % ДИ 0,79–0,91) [McFarland, 2007]. Относительное значительное снижение диареи путешественников в группе S. boulardii по сравнению с контролем в двух РКИ колебалось от 5% до 11% [Kollaritsch et al .1989, 1993]. Это ограниченное количество исследований показывает, что пробиотики могут быть более эффективными для предотвращения диареи путешественников, чем для лечения диареи, когда она становится симптоматической.

Инфекция Helicobacter pylori

Недавний метаанализ с участием 14 РКИ (1671 пациент) оценил роль пробиотиков в ликвидации H. pylori [Tong et al . 2007]. У пациентов с инфекцией H. pylori добавление пробиотиков улучшило скорость эрадикации и уменьшило побочные эффекты, связанные с лечением, и отдельные симптомы [Tong et al .2007]. В этом метаанализе только одно РКИ оценивало S. boulardii и обнаружило, что оно снижает риск диареи при одновременном назначении пациентам, получающим тройную эрадикационную терапию для H. pylori [Duman et al . 2005]. S. boulardii вызывает морфологические изменения в клетках H. pylori , соответствующие клеточному повреждению [Vandenplas et al . 2009], и было показано, что он снижает колонизацию H. pylori у инфицированных детей на 12% [Gotteland et al .2005]. Из четырех РКИ, тестирующих S. boulardii на инфекцию H. pylori , два проводились с участием детей [Gotteland et al . 2005; Hurduc и др. . 2009] и два — у взрослых [Cindoruk et al . 2007; Cremonini и др. . 2002]. Хотя не было значительных различий в эрадикации H. pylori между группами S. boulardii и плацебо, наблюдалась значительно более низкая относительная частота AAD (16,1–25%). В недавнем метаанализе кодек H.pylori в группе тройной терапии составил 71% и значительно увеличился до 80% при добавлении S. boulardii [Szajewska et al . 2010]. Таким образом, S. boulardii может быть неэффективным для уничтожения самого H. pylori , но он эффективен для уменьшения побочных эффектов стандартной тройной терапии.

Клиническая эффективность

• Barc M.C., Charrin-Sarnel C., Rochet V., Bourlioux F., Sandre C., Boureau H., et al. (2008) Молекулярный анализ пищеварительной микробиоты на модели гнотобиотических мышей во время лечения антибиотиками: влияние Saccharomyces boulardii .Анаэроб 14: 229–233 [PubMed] [Google Scholar]
• Бартлетт Дж. (2002) Клиническая практика. Диарея, связанная с приемом антибиотиков. N Engl J Med 346: 334–339 [PubMed] [Google Scholar]
• Беннани А. (1990) Рандомизированное испытание Saccharomyces boulardii в лечении функциональных заболеваний толстой кишки. L’Objectif Medical 73: 56–61 [Google Scholar]
• Бесирбеллиоглу Б.А., Улчай А., Джан М., Эрдем Х., Танюксель М., Авджи И.Ю. и др. (2006) Saccharomyces boulardii и инфекция, вызванная Giardia lamblia .Сканд Дж. Инфекция Дис 38: 479–481 [PubMed] [Google Scholar]
• Биллоо А.Г., Мемон М.А., Хасхели С.А., Муртаза Г., Икбал К., Саид С.М. и др. (2006) Роль пробиотика ( Saccharomyces boulardii ) в лечении и профилактике диареи. Мир Дж Гастроэнтерол 12: 4557–4560 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Биссон Дж. Ф., Идальго С., Розан П., Мессауди М. (2010) Профилактические эффекты различных пробиотических составов на модели диареи путешественников у крыс Wistar: профилактические эффекты пробиотиков на TD.Dig Dis Sci 55: 911–919 [PubMed] [Google Scholar]
• Blehaut H., Massot J., Elmer G.W., Levy R.H. (1989) Кинетика распределения Saccharomyces boulardii у человека и крысы. Утилизация лекарств Biopharm 10: 353–364 [PubMed] [Google Scholar]
• Bleichner G., Blehaut H., Mentec H., Moyse D. (1997) Saccharomyces boulardii предотвращает диарею у тяжелобольных пациентов, питающихся через зонд. Многоцентровое рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Интенсивная терапия 23: 517–523 [PubMed] [Google Scholar]
• Брандао Р.Л., Кастро И.М., Бамбирра Е.А., Амарал С.С., Фиетто Л.Г., Тропиа М.Дж. и др. (1998) Внутриклеточный сигнал, запускаемый токсином холеры у Saccharomyces boulardii и Saccharomyces cerevisiae . Appl Environ Microbiol 64: 564–568 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Breves G., Faul K., Schroder B., Holst H., Caspary WF, Stein J. (2000) Применение метода моделирования толстой кишки для изучения воздействия Saccharomyces boulardii на основные параметры микробного метаболизма слепой кишки свиней. клиндамицином.Пищеварение 61: 193–200 [PubMed] [Google Scholar]
• Burkhardt O., Kohnlein T., Pletz M., Welte T. (2005) Сепсис, вызванный Saccharomyces boulardii : успешная терапия вориконазолом после неэффективности лечения флуконазолом. Сканд Дж. Инфекция Дис 37: 69–72 [PubMed] [Google Scholar]
• Бутс Дж. П. (2009) Двадцать пять лет исследований трофических эффектов Saccharomyces boulardii : обновления и перспективы. Dig Dis Sci 54: 15–18 [PubMed] [Google Scholar]
• Бутс Дж.П., Бернаскони П., Ваерман Дж. П., Дайв К. (1990) Стимуляция секреторного IgA и секреторного компонента иммуноглобулинов в тонком кишечнике крыс, получавших Saccharomyces boulardii . Dig Dis Sci 35: 251–256 [PubMed] [Google Scholar]
• Buts J.P., Bernasconi P., Van Craynest M.P., Maldague P., De M.R. (1986) Ответ слизистой оболочки тонкого кишечника человека и крысы на пероральное введение Saccharomyces boulardii . Педиатр Рес 20: 192–196 [PubMed] [Google Scholar]
• Бутс Дж.P., Corthier G., Delmee M. (1993) Saccharomyces boulardii для энтеропатий, связанных с Clostridium difficile, у младенцев. J Педиатр Гастроэнтерол Нутр 16: 419–425 [PubMed] [Google Scholar]
• Buts J.P., De K.N., De R.L. (1994) Saccharomyces boulardii усиливает экспрессию кишечных ферментов крыс за счет внутрипросветного высвобождения полиаминов. Педиатр Рес 36: 522–527 [PubMed] [Google Scholar]
• Buts J.P., De K.N., Marandi S., Hermans D., Sokal E.M., Chae Y.H. и др.(1999) Saccharomyces boulardii улучшает клеточную адаптацию после проксимальной энтерэктомии у крыс. Кишечник 45: 89–96 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Buts J.P., De K.N., Stilmant C., Sokal E., Marandi S. (2002) Saccharomyces boulardii усиливает гидролиз N-концевого пептида в тонком кишечнике крысы-сосунка за счет высвобождения цинк-связывающей металлопротеиназы внутри просвета. Педиатр Рес 51: 528–534 [PubMed] [Google Scholar]
• Буц Дж. П., Декейзер Н., Стилмант К., Delem E., Smets F., Sokal E. (2006) Saccharomyces boulardii продуцирует в тонком кишечнике крысы новую протеинфосфатазу, которая ингибирует эндотоксин Escherichia coli путем дефосфорилирования. Педиатр Рес 60: 24–29 [PubMed] [Google Scholar]
• Бутс Дж. П., Дюрантон Б., Де К. Н., Сокал Э. М., Маернхаут А.С., Рауль Ф. и др. (1998) Преждевременная стимуляция сахарозы-изомальтазы (SI) крысы экзогенным инсулином и аналогом B-Asp10 регулируется рецептор-опосредованным сигналом, запускающим транскрипцию гена SI.Педиатр Рес 43: 585–591 [PubMed] [Google Scholar]
• Каэтано Дж. А., Парамес М. Т., Бабо М. Дж., Сантос А., Феррейра А. Б., Фрейтас А. А. и др. (1986) Иммунофармакологические эффекты Saccharomyces boulardii у здоровых добровольцев. Int J Immunopharmacol 8: 245–259 [PubMed] [Google Scholar]
• Каин А.М., Карпа К.Д. (2011) Клиническая полезность пробиотиков при воспалительном заболевании кишечника. Альтернативная медицина Ther Health 17: 72–79 [PubMed] [Google Scholar]
• Может М., Besirbellioglu B.A., Avci I.Y., Beker C.M., Pahsa A. (2006) Prophylactic Saccharomyces boulardii в профилактике диареи, связанной с антибиотиками: проспективное исследование. Med Sci Monit 12: I19-I22 [PubMed] [Google Scholar]
• Канани Р. Б., Чирилло П., Террин Г., Чезарано Л., Спаньоло М. И., Де В. А. и др. (2007) Пробиотики для лечения острой диареи у детей: рандомизированное клиническое испытание пяти различных препаратов. BMJ 335: 340. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Канил К., Rosenshine I., Ruschkowski S., Donnenberg M.S., Kaper J.B., Finlay B.B. (1993) Enteropathogenic Escherichia coli снижает трансэпителиальное электрическое сопротивление поляризованных эпителиальных монослоев. Заразить иммунную 61: 2755–2762 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Каноничи А., Сирет К., Пеллегрино Э., Понтье-Брес Р., Пуйе Л., Монтеро М.П. и др. (2011) Saccharomyces boulardii улучшает восстановление клеток кишечника за счет активации рецептора коллагена интегрина альфа2бета1.PLoS One 6: e18427. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Castagliuolo I., LaMont J.T., Nikulasson S.T., Pothoulakis C. (1996) Протеаза Saccharomyces boulardii ингибирует эффекты Clostridium difficile токсина A в подвздошной кишке крысы. Заразить иммунную 64: 5225–5232 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Castagliuolo I., Riegler M.F., Valenick L., LaMont J.T., Pothoulakis C. (1999) Протеаза Saccharomyces boulardii ингибирует эффекты Clostridium difficile токсинов A и B в слизистой оболочке толстой кишки человека.Заразить иммунную 67: 302–307 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Castaneda C., Garcia E., Santa Cruz M., Fernandez M., Monterrey P. (1995) Эффекты Saccharomyces boulardii у детей с хронической диареей, особенно в случаях, вызванных лямблиозом. Преподобный Mex Pueric Pediatr 2: 12–16 [Google Scholar]
• Castex F., Corthier G., Jouvert S., Elmer G.W., Lucas F., Bastide M. (1990) Профилактика экспериментального псевдомембранозного колита, вызванного Clostridium difficile , с помощью Saccharomyces boulardii : сканирующее электронно-микроскопическое и микробиологическое исследование.J Gen Microbiol 136: 1085–1089 [PubMed] [Google Scholar]
• Чен X., Коккотоу Э.Г., Мустафа Н., Бхаскар К.Р., Сугиоултзис С., О’Брайен М. и др. (2006) Saccharomyces boulardii ингибирует активацию митоген-активируемой протеинкиназы ERK1 / 2 как in vitro, так и in vivo и защищает от энтерита, индуцированного токсином A. Clostridium difficile . J Biol Chem 281: 24449–24454 [PubMed] [Google Scholar]
• Чхве Ч., Чо С. Ю., Пак Х. Дж., Чанг С. К., Бён Дж., Мён С.J. (2011) Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое многоцентровое исследование Saccharomyces boulardii при синдроме раздраженного кишечника: влияние на качество жизни. J Clin Gastroenterol, в печати [PubMed] [Google Scholar]
• Циндорук М., Эркан Г., Каракан Т., Дурсун А., Унал С. (2007) Эффективность и безопасность Saccharomyces boulardii в 14-дневной тройной терапии против Helicobacter pylori : проспективная рандомизированная плацебо-контролируемая двойное слепое исследование. Helicobacter 12: 309–316 [PubMed] [Google Scholar]
• Коэн С.Х., Гердинг Д.Н., Джонсон С., Келли К.П., Лу В.Г., Макдональд Л.С. и др. (2010) Руководство по клинической практике для инфекции Clostridium difficile у взрослых: обновление 2010 г., подготовленное обществом эпидемиологии здравоохранения Америки (SHEA) и Обществом инфекционных болезней Америки (IDSA). Инфекционный контроль Hosp Epidemiol 31: 431–455 [PubMed] [Google Scholar]
• Кремонини Ф., Ди К.С., Ковино М., Армуцци А., Габриэлли М., Сантарелли Л. и др. (2002) Влияние различных пробиотических препаратов на побочные эффекты терапии против Helicobacter pylori : параллельное групповое, тройное слепое, плацебо-контролируемое исследование.Am J Gastroenterol 97: 2744–2749 [PubMed] [Google Scholar]
• Czerucka D., Dahan S., Mograbi B., Rossi B., Rampal P. (2000) Saccharomyces boulardii сохраняет барьерную функцию и модулирует путь передачи сигнала, индуцированный в энтеропатогенных клетках Т84, инфицированных Escherichia coli . Заразить иммунную 68: 5998–6004 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Czerucka D., Piche T., Rampal P. (2007) Обзорная статья: дрожжи как пробиотики — Saccharomyces boulardii .Алимент Фармакол Тер 26: 767–778 [PubMed] [Google Scholar]
• Czerucka D., Rampal P. (2002) Экспериментальные эффекты Saccharomyces boulardii на возбудителей диарейных болезней. Микробы заражают 4: 733–739 [PubMed] [Google Scholar]
• Czerucka D., Roux I., Rampal P. (1994) Saccharomyces boulardii ингибирует опосредуемую секрецией стимуляцию аденозин-3 ’, 5’-циклического монофосфата в клетках кишечника. Гастроэнтерология 106: 65–72 [PubMed] [Google Scholar]
• Дахан С., Busuttil V., Imbert V., Peyron JF, Rampal P., Czerucka D. (2002) Энтерогеморрагическая инфекция Escherichia coli индуцирует выработку интерлейкина-8 посредством активации митоген-активированных протеинкиназ и факторов транскрипции NF-kappaB и AP -1 в клетках Т84. Заразить иммунную 70: 2304–2310 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Dahan S., Dalmasso G., Imbert V., Peyron J.F., Rampal P., Czerucka D. (2003) Saccharomyces boulardii вмешивается в энтерогеморрагические пути передачи сигналов, индуцированные Escherichia coli в клетках T84.Заразить иммунную 71: 766–773 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Далмассо Г., Коттрез Ф., Имберт В., Лагадек П., Пейрон Дж. Ф., Рампал П. и др. (2006a) Saccharomyces boulardii подавляет воспалительные заболевания кишечника, улавливая Т-клетки в мезентериальных лимфатических узлах. Гастроэнтерология 131: 1812–1825 [PubMed] [Google Scholar]
• Dalmasso G., Loubat A., Dahan S., Calle G., Rampal P., Czerucka D. (2006b) Saccharomyces boulardii предотвращает индуцированный TNF-альфа апоптоз в EHEC-инфицированных клетках T84.Res Microbiol 157: 456–465 [PubMed] [Google Scholar]
• Dinleyici E.C., Eren M., Dogan N., Reyhanioglu S., Yargic Z.A., Vandenplas Y. (2011) Клиническая эффективность Saccharomyces boulardii или метронидазола у детей с симптомами инфекции Blastocystis hominis . Parasitol Res 108: 541–545 [PubMed] [Google Scholar]
• Dinleyici EC, Eren M., Yargic ZA, Dogan N., Vandenplas Y. (2009) Клиническая эффективность Saccharomyces boulardii и метронидазола по сравнению с одним только метронидазолом у детей с острой кровавой диареей, вызванной амебиазом: проспективная, рандомизированная, открытая этикетка учиться.Am J Trop Med Hyg 80: 953–955 [PubMed] [Google Scholar]
• Думан Д.Г., Бор С., Озутемиз О., Сахин Т., Огуз Д., Истан Ф. и др. (2005) Эффективность и безопасность Saccharomyces boulardii в профилактике антибиотико-ассоциированной диареи из-за эрадикации Helicobacter pylori . Eur J Гастроэнтерол Гепатол 17: 1357–1361 [PubMed] [Google Scholar]
• Elmer G.W., Corthier G. (1991) Модуляция индуцированной Clostridium difficile смертности в зависимости от дозы и жизнеспособности Saccharomyces boulardii , используемых в качестве профилактического средства у мышей-гнотобиотов.Может J Microbiol 37: 315–317 [PubMed] [Google Scholar]
• Элмер Г.В., Мартин С.В., Хорнер К.Л., Макфарланд Л.В., Леви Р.Х. (1999a) Выживание Saccharomyces boulardii в желудочно-кишечном тракте крыс и влияние пищевых волокон. Микроб Экология Здоровье Dis 11: 29–34 [Google Scholar]
• Элмер Г.В., Макфарланд Л.В., Суравич К.М., Данко Л., Гринберг Р.Н. (1999b) Поведение Saccharomyces boulardii у пациентов с рецидивирующим заболеванием Clostridium difficile .Алимент Фармакол Тер 13: 1663–1668 [PubMed] [Google Scholar]
• Элмер Г.В., Мойер К.А., Вега Р., Суравич К.М., Коллиер А.С., Хутон Т.М. и др. (1995) Оценка Saccharomyces boulardii для пациентов с хронической диареей, связанной с ВИЧ, и у здоровых добровольцев, получающих противогрибковые препараты. Microb Ther 25: 23–31 [Google Scholar]
• Фидан И., Калканци А., Есилюрт Э., Ялчин Б., Эрдал Б., Кустимур С. и др. (2009) Влияние Saccharomyces boulardii на секрецию цитокинов интраэпителиальными лимфоцитами, инфицированными Escherichia coli и Candida albicans.Микозы 52: 29–34 [PubMed] [Google Scholar]
• Floch M.H., Walker W.A., Guandalini S., Hibberd P., Gorbach S., Surawicz C., et al. (2008) Рекомендации по использованию пробиотиков — 2008. Дж Клин Гастроэнтерол 42 (Приложение 2): S104-S108 [PubMed] [Google Scholar]
• Гаон Д., Гарсия Х., Винтер Л. (2003) Влияние штаммов Lactobacillus и Saccharomyces boulardii на стойкую диарею у детей. Medicina (B Aires) 63: 293–298 [PubMed] [Google Scholar]
• Гарсия В.E., Де Лурдес Де, Абреу Ф., Освальдо Да, Гама Т.Х., Герра П.А., Каролина Карнейро А.А., Пайва М.Ф. и др. (2008) Влияние Saccharomyces boulardii на кишечную проницаемость пациентов с болезнью Крона в стадии ремиссии. Сканд Дж Гастроэнтерол 43: 842–848 [PubMed] [Google Scholar]
• Гаро М.Г., Шерман П.М., Уокер В.А. (2010) Пробиотики и кишечная микробиота при здоровье и болезнях кишечника. Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол 7: 503–514 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Гедек Б.R. (1999a) Прикрепление Escherichia coli серогруппы О 157 и мутанта Salmonella typhimurium DT 104 к поверхности Saccharomyces boulardii . Микозы 42: 261–264 [PubMed] [Google Scholar]
• Гедек Б.Р. (1999b) Адгезия Escherichia coli серогруппы О 157 и мутанта Salmonella typhimurium DT 104 к поверхности Saccharomyces boulardii . Микозы 42: 261–264 [PubMed] [Google Scholar]
• Дженерозо С.В., Виана М.Л., Сантос Р.Г., Арантес Р.М., Мартинс Ф.С., Николи Дж.Р. и др. (2011) Защита от повышенной кишечной проницаемости и бактериальной транслокации, вызванной кишечной непроходимостью, у мышей, получавших жизнеспособные и убитые нагреванием Saccharomyces boulardii . Eur J Nutr 50: 261–269 [PubMed] [Google Scholar]
• Гейик М.Ф., Алдемир М., Хосоглу С., Аяз К., Сатилмис С., Буюкбайрам Х. и др. (2006) Влияние Saccharomyces boulardii на бактериальную транслокацию у крыс с механической желтухой.Ann R Coll Surg Engl 88: 176–180 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Girard P., Pansart Y., Gillardin J.M. (2005) Индуцируемое участие синтазы оксида азота в механизме действия Saccharomyces boulardii при диарее, вызванной касторовым маслом, у крыс. Оксид азота 13: 163–169 [PubMed] [Google Scholar]
• Горбач С.Л. (2000) Пробиотики и здоровье желудочно-кишечного тракта. Am J Gastroenterol 95: S2-S4 [PubMed] [Google Scholar]
• Готтеланд М., Поляк Л., Cruchet S., Brunser O. (2005) Эффект регулярного приема внутрь Saccharomyces boulardii плюс инулин или Lactobacillus acidophilus LB у детей, колонизированных Helicobacter pylori . Acta Paediatr 94: 1747–1751 [PubMed] [Google Scholar]
• Graff S., Chaumeil J.C., Boy P., Lai-Kuen R., Charrueau C. (2008a) Составы для защиты пробиотика Saccharomyces boulardii от разложения в кислой среде. Биол Фарм Булл 31: 266–272 [PubMed] [Google Scholar]
• Графф С., Chaumeil J.C., Boy P., Lai-Kuen R., Charrueau C. (2008b) Влияние условий pH на жизнеспособность дрожжей Saccharomyces boulardii . J Gen Appl Microbiol 54: 221–227 [PubMed] [Google Scholar]
• Гуарино А., Альбано Ф., Ашкенази С., Гендрел Д., Хоэкстра Дж. Х., Шамир Р. и др. (2008) Европейское общество детской гастроэнтерологии, гепатологии и питания / Европейское общество детских инфекционных заболеваний, основанное на фактических данных, руководство по лечению острого гастроэнтерита у детей в Европе.J Педиатр Гастроэнтерол Нутр 46 (Приложение 2): S81 – S122 [PubMed] [Google Scholar]
• Guslandi M. (2010) Saccharomyces boulardii плюс рифаксимин при язвенном колите, не переносящем мезаламин. Дж Клин Гастроэнтерол 44: 385. [PubMed] [Google Scholar]
• Гусланди М. (2011) Лечение синдрома раздраженного кишечника с помощью Saccharomyces boulardii . J Clin Gastroenterol, в печати [PubMed] [Google Scholar]
• Гусланди М., Джолло П., Тестони П.А. (2003) Пилотное испытание Saccharomyces boulardii при язвенном колите.Eur J Гастроэнтерол Гепатол 15: 697–698 [PubMed] [Google Scholar]
• Гусланди М., Мецци Г., Сорги М., Тестони П.А. (2000) Saccharomyces boulardii в поддерживающем лечении болезни Крона. Dig Dis Sci 45: 1462–1464 [PubMed] [Google Scholar]
• Хеннекен К., Кауфманн-Лакруа К., Жобер А., Виард Дж. П., Рикур К., Жакмен Дж. Л. и др. (2000) Возможная роль катетеров при фунгемии Saccharomyces boulardii . Eur J Clin Microbiol Infect Dis 19: 16–20 [PubMed] [Google Scholar]
• Херек О., Кара И.Г., Калели И. (2004) Влияние антибиотиков и Saccharomyces boulardii на бактериальную транслокацию при ожоговой травме. Хирург сегодня 34: 256–260 [PubMed] [Google Scholar]
• Хохтер В., Чейз Д., Хагенхофф Г. (1990) Saccharomyces boulardii при острой диарее у взрослых: эффективность и переносимость лечения. Мунк Мед Вшр 132: 188–192 [Google Scholar]
• Хтве К., Йи К.С., Тин М., Ванденплас Ю. (2008) Эффект Saccharomyces boulardii при лечении острой водянистой диареи у детей Мьянмы: рандомизированное контролируемое исследование.Am J Trop Med Hyg 78: 214–216 [PubMed] [Google Scholar]
• Hurduc V., Plesca D., Dragomir D., Sajin M., Vandenplas Y. (2009) Рандомизированное открытое испытание, оценивающее влияние Saccharomyces boulardii на скорость эрадикации инфекции Helicobacter pylori у детей. Acta Paediatr 98: 127–131 [PubMed] [Google Scholar]
• Хван Дж. Б., Кан К. Дж., Кан Ю. Н., Ким А. С. (2009) Пробиотическая желудочно-кишечная аллергическая реакция, вызванная Saccharomyces boulardii .Энн Аллергия Астма Иммунол 103: 87–88 [PubMed] [Google Scholar]
• Им Э., Поулакис С. (2010) [Последние достижения в исследовании Saccharomyces boulardii ]. Гастроэнтерол Клин Биол 34 (Приложение 1): S62 – S70 [PubMed] [Google Scholar]
• Ян Х.У., Ульрих Р., Шнайдер Т., Лир Р.М., Шифердеккер Х.Л., Холст Х. и др. (1996) Иммунологические и трофические эффекты Saccharomyces boulardii на тонкий кишечник у здоровых добровольцев. Пищеварение 57: 95–104 [PubMed] [Google Scholar]
• Каяндер К., Myllyluoma E., Rajilic-Stojanovic M., Kyronpalo S., Rasmussen M., Jarvenpaa S., et al. (2008) Клиническое испытание: добавка многовидовых пробиотиков облегчает симптомы синдрома раздраженного кишечника и стабилизирует кишечную микробиоту. Алимент Фармакол Тер 27: 48–57 [PubMed] [Google Scholar]
• Кляйн С.М., Элмер Г.В., МакФарланд Л.В., Суравич К.М., Леви Р.Х. (1993) Восстановление и удаление биотерапевтического агента, Saccharomyces boulardii , у здоровых добровольцев.Pharm Res 10: 1615–1619 [PubMed] [Google Scholar]
• Колларич Х., Холст Х., Гробара П., Видерманн Г. (1993) [Профилактика диареи путешественников с помощью Saccharomyces boulardii . Результаты плацебо-контролируемого двойного слепого исследования. Fortschr Med 111: 152–156 [PubMed] [Google Scholar]
• Колларич Х., Кремснер П., Видерманн Г., Шайнер О. (1989) Профилактика диареи путешественников: сравнение различных неантибиотических препаратов. Travel Med Internat 7: 9–18 [Google Scholar]
• Котовская М., Альбрехт П., Шаевска Х. (2005) Saccharomyces boulardii в профилактике антибиотико-ассоциированной диареи у детей: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Алимент Фармакол Тер 21: 583–590 [PubMed] [Google Scholar]
• Куругол З., Котуроглу Г. (2005) Эффекты Saccharomyces boulardii у детей с острой диареей. Acta Paediatr 94: 44–47 [PubMed] [Google Scholar]
• Кайн Л., Варни М., Камар А., Келли К.П. (2001) Связь между ответом антител на токсин А и защитой от рецидивирующей диареи Clostridium difficile .Ланцет 357: 189–193 [PubMed] [Google Scholar]
• Ли С.К., Ким Х.Дж., Чи С.Г., Чан Дж.Й., Нам К.Д., Ким Н.Х. и др. (2005) [ Saccharomyces boulardii активирует экспрессию гамма-рецептора, активируемого пролифератором пероксисом, в клетках HT-29]. Корейский J Гастроэнтерол 45: 328–334 [PubMed] [Google Scholar]
• Ли С.К., Ким Ю.В., Чи С.Г., Джу Ю.С., Ким Х.Дж. (2009) Влияние Saccharomyces boulardii на клетки толстой кишки человека и воспаление у крыс с колитом, вызванным тринитробензолсульфоновой кислотой.Dig Dis Sci 54: 255–263 [PubMed] [Google Scholar]
• Мансур-Ганаи Ф., Дехбаши Н., Язданпараст К., Шафаги А. (2003) Эффективность Saccharomyces boulardii с антибиотиками при остром амебиазе. Мир Дж Гастроэнтерол 9: 1832–1833 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Marcobal A., Underwood M.A., Mills D.A. (2008) Быстрое определение бактериального состава коммерческих пробиотических продуктов с помощью анализа полиморфизма длины концевых рестрикционных фрагментов.J Педиатр Гастроэнтерол Нутр 46: 608–611 [PubMed] [Google Scholar]
• Мартинс Ф.С., Нарди Р.М., Арантес Р.М., Роза С.А., Невес М.Дж., Николи Дж.Р. (2005) Скрининг дрожжей как пробиотиков на основе их способности колонизировать желудочно-кишечный тракт и защищать мышей от заражения энтеропатогеном. J Gen Appl Microbiol 51: 83–92 [PubMed] [Google Scholar]
• Martins F.S., Veloso L.C., Arantes R.M., Nicoli J.R. (2009) Влияние состава дрожжевого пробиотика на жизнеспособность, восстановление и защиту от инфекции Salmonella enterica ssp.enterica серовар Typhimurium у мышей. Lett Appl Microbiol 49: 738–744 [PubMed] [Google Scholar]
• Masco L., Huys G., De B.E., Temmerman R., Swings J. (2005) Культурно-зависимый и независимый от культуры качественный анализ пробиотических продуктов, которые, как утверждается, содержат бифидобактерии. Пищевой микробиол Int J 102: 221–230 [PubMed] [Google Scholar]
• Maupas J.L., Champemont P., Delforge M. (1983) Лечение синдрома раздраженного кишечника с помощью Saccharomyces boulardii : двойное слепое плацебо-контролируемое исследование.Med Chir Dig 12: 77–79 [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В. (2006) Мета-анализ пробиотиков для профилактики диареи, связанной с антибиотиками, и лечения болезни, вызванной Clostridium difficile , . Am J Gastroenterol 101: 812–822 [PubMed] [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В. (2007) Мета-анализ пробиотиков для профилактики диареи путешественников. Travel Med Infect Dis 5: 97–105 [PubMed] [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В. (2009) Выявление причин отрицательных результатов исследований: случай S boulardii для профилактики диареи, связанной с антибиотиками.Rev Med Chil 137: 719–720 [PubMed] [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В. (2010) Систематический обзор и метаанализ Saccharomyces boulardii у взрослых пациентов. Мир Дж Гастроэнтерол 16: 2202–2222 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В., Дублин С. (2008) Мета-анализ пробиотиков для лечения синдрома раздраженного кишечника. Мир Дж Гастроэнтерол 14: 2650–2661 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• МакФарланд Л.В., Суравич К.М., Гринберг Р.Н., Фекети Р., Элмер Г.В., Мойер К.А. и др. (1994) Рандомизированное плацебо-контролируемое исследование Saccharomyces boulardii в сочетании со стандартными антибиотиками для лечения болезни Clostridium difficile . JAMA 271: 1913–1918 [PubMed] [Google Scholar]
• Муми К.Л., Чен Х., Келли К.П., Маккормик Б.А. (2008) Saccharomyces boulardii вмешивается в патогенез Shigella посредством постинвазионных сигнальных событий. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294: G599 – G609 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Пант Н., Marcotte H., Brussow H., Svensson L., Hammarstrom L. (2007) Эффективная профилактика ротавирусной диареи с использованием комбинации Lactobacillus rhamnosus GG и антител. BMC Microbiol 7: 86. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Parkes G.C., Brostoff J., Whelan K., Sanderson J.D. (2008) Желудочно-кишечная микробиота при синдроме раздраженного кишечника: их роль в его патогенезе и лечении. Am J Gastroenterol 103: 1557–1567 [PubMed] [Google Scholar]
• Плейн К., Hotz J. (1993) Терапевтические эффекты Saccharomyces boulardii на умеренные остаточные симптомы в стабильной фазе болезни Крона с особым вниманием к хронической диарее — пилотное исследование. Z Гастроэнтерол 31: 129–134 [PubMed] [Google Scholar]
• Pothoulakis C. (2009) Обзорная статья: противовоспалительные механизмы действия Saccharomyces boulardii . Алимент Фармакол Тер 30: 826–833 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Поулакис К., Келли К.П., Джоши М.А., Гао Н., О’Кин С.Дж., Кастаглиуоло И. и др. (1993) Saccharomyces boulardii ингибирует Clostridium difficile связывание токсина A и энтеротоксичность в подвздошной кишке крысы. Гастроэнтерология 104: 1108–1115 [PubMed] [Google Scholar]
• Камар А., Абудола С., Варни М., Мичетти П., Поулакис К., Ламонт Дж. Т. и др. (2001) Saccharomyces boulardii стимулирует иммунный ответ кишечного иммуноглобулина А на токсин А Clostridium difficile у мышей.Заразить иммунную 69: 2762–2765 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Rigothier M.C., Maccario J., Gayral P. (1994) Ингибирующая активность дрожжей saccharomyces в отношении адгезии трофозоитов Entamoeba histolytica к человеческим эритроцитам in vitro . Parasitol Res 80: 10–15 [PubMed] [Google Scholar]
• Родригес А.К., Кара Д.К., Фретес С.Х., Кунья F.Q., Виейра Е.С., Николи Дж.Р. и др. (2000) Saccharomyces boulardii стимулирует продукцию sIgA и фагоцитарную систему мышей-гнотобиотов.J Appl Microbiol 89: 404–414 [PubMed] [Google Scholar]
• Родригес А.С., Нарди Р.М., Бамбирра Е.А., Виейра Е.С., Николи Дж.Р. (1996) Эффект Saccharomyces boulardii против экспериментальной оральной инфекции Salmonella typhimurium и Shigella flexneri у обычных и гнотобиотических мышей. J Appl Bacteriol 81: 251–256 [PubMed] [Google Scholar]
• Сен-Марк Т., Росселло-Пратс Л., Турень Дж. Л. (1991) [Эффективность Saccharomyces boulardii при лечении диареи при СПИДе].Ann Med Interne (Париж) 142: 64–65 [PubMed] [Google Scholar]
• Шлоттерер М., Бернаскони П., Лебретон Ф., Вассерманн Д. (1987) Значение Saccharomyces boulardii для пищеварительной приемлемости непрерывного энтерального питания у пациентов с ожогами. Нутр Клин Метабол 1: 31–34 [Google Scholar]
• Schneider S.M., Girard-Pipau F., Filippi J., Hebuterne X., Moyse D., Hinojosa G.C. и др. (2005) Влияние Saccharomyces boulardii на фекальные короткоцепочечные жирные кислоты и микрофлору у пациентов при длительном полном энтеральном питании.Мир Дж Гастроэнтерол 11: 6165–6169 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Швенцер В. (1998) Saccharomyces boulardii. Deutsche Apotheker Zeitung 138: 75–77 [Google Scholar]
• Сезер А., Уста У., Цицин И. (2009) Влияние Saccharomyces boulardii на уменьшение вызванного иринотеканом кишечного мукозита и диареи. Мед Онкол 26: 350–357 [PubMed] [Google Scholar]
• Sougioultzis S., Simeonidis S., Bhaskar K.R., Chen X., Антон П.М., Китс С., и другие. (2006) Saccharomyces boulardii продуцирует растворимый противовоспалительный фактор, который ингибирует опосредованную NF-kappaB экспрессию гена IL-8. Biochem Biophys Res Commun 343: 69–76 [PubMed] [Google Scholar]
• Суравич К.М., МакФарланд Л.В., Гринберг Р.Н., Рубин М., Фекети Р., Маллиган М.Э. и др. (2000) Поиск лучшего лечения рецидивирующей болезни Clostridium difficile : использование высоких доз ванкомицина в сочетании с Saccharomyces boulardii .Clin Infect Dis 31: 1012–1017 [PubMed] [Google Scholar]
• Свидсински А., Ленинг-Бауке В., Верстрален Х., Осовска С., Дёрффель Ю. (2008) Биоструктура фекальной микробиоты у здоровых субъектов и пациентов с хронической идиопатической диареей. Гастроэнтерология 135: 568–579 [PubMed] [Google Scholar]
• Szajewska H., Horvath A., Piwowarczyk A. (2010) Мета-анализ: влияние добавки Saccharomyces boulardii на скорость эрадикации Helicobacter pylori и побочные эффекты во время лечения.Алимент Фармакол Тер 32: 1069–1079 [PubMed] [Google Scholar]
• Szajewska H., Mrukowicz J. (2005) Мета-анализ: непатогенные дрожжи Saccharomyces boulardii в профилактике диареи, связанной с антибиотиками. Алимент Фармакол Тер 22: 365–372 [PubMed] [Google Scholar]
• Szajewska H., Setty M., Mrukowicz J., Guandalini S. (2006) Пробиотики при желудочно-кишечных заболеваниях у детей: веские и не очень веские доказательства эффективности. J Педиатр Гастроэнтерол Нутр 42: 454–475 [PubMed] [Google Scholar]
• Шаевская Х., Скорка А. (2009) Saccharomyces boulardii для лечения острого гастроэнтерита у детей: обновленный метаанализ рандомизированных контролируемых исследований. Алимент Фармакол Тер 30: 960–961 [PubMed] [Google Scholar]
• Szajewska H., Skorka A., Dylag M. (2007) Мета-анализ: Saccharomyces boulardii для лечения острой диареи у детей. Алимент Фармакол Тер 25: 257–264 [PubMed] [Google Scholar]
• Tasteyre A., Barc M.C., Karjalainen T., Bourlioux P., Collignon A.(2002) Ингибирование клеточной адгезии Clostridium difficile in vitro с помощью Saccharomyces boulardii . Микроб Патог 32: 219–225 [PubMed] [Google Scholar]
• Tempe J.D., Steidel A.L., Blehaut H., Hasselmann M., Lutun P., Maurier F. (1983) [Профилактика диареи путем введения Saccharomyces boulardii во время непрерывного энтерального питания]. Сем хоп 59: 1409–1412 [PubMed] [Google Scholar]
• Thomas S., Przesdzing I., Metzke D., Schmitz J., Radbruch A., Baumgart D.C. (2009) Saccharomyces boulardii ингибирует индуцированную липополисахаридом активацию дендритных клеток человека и пролиферацию Т-клеток. Клин Эксп Иммунол 156: 78–87 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Тонг Дж. Л., Ран З. Х., Шен Дж., Чжан К. Х., Сяо С. Д. (2007) Мета-анализ: влияние добавления пробиотиков на частоту эрадикации и побочные эффекты во время эрадикационной терапии Helicobacter pylori . Алимент Фармакол Тер 25: 155–168 [PubMed] [Google Scholar]
• Тутейкер Р.Д., Элмер Г.В. (1984) Предотвращение гибели хомяков, вызванной клиндамицином, с помощью Saccharomyces boulardii . Противомикробные агенты Chemother 26: 552–556 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Vandenplas Y., Brunser O., Szajewska H. (2009) Saccharomyces boulardii в детстве. Eur J Pediatr 168: 253–265 [PubMed] [Google Scholar]
• Венугопалан В., Шрайнер К.А., Вонг-Берингер А. (2010) Нормативный надзор и безопасность использования пробиотиков. Emerg Infect Dis 16: 1661–1665 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Видон Н., Huchet B., Rambaud J.C. (1986) [Влияние Saccharomyces boulardii на секрецию тощей кишки у крыс, индуцированную токсином холеры]. Гастроэнтерол Клин Биол 10: 13–16 [PubMed] [Google Scholar]
• Вильярруэль Г., Рубио Д.М., Лопес Ф., Чинтиони Дж., Гуревеч Р., Ромеро Г. и др. (2007) Saccharomyces boulardii при острой диарее у детей: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Acta Paediatr 96: 538–541 [PubMed] [Google Scholar]
• Weese J.S. (2003) Оценка недостатков в маркировке коммерческих пробиотиков.Может Ветеринар J 44: 982–983 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Уилан К., Майерс С.Е. (2010) Безопасность пробиотиков у пациентов, получающих нутритивную поддержку: систематический обзор историй болезни, рандомизированных контролируемых испытаний и нерандомизированных испытаний. Am J Clin Nutr 91: 687–703 [PubMed] [Google Scholar]
• Ву X., Валланс Б.А., Бойер Л., Бергстром К.С., Уокер Дж., Мэдсен К. и др. (2008) Saccharomyces boulardii уменьшает колит, вызванный Citrobacter rodentium , за счет воздействия на факторы бактериальной вирулентности.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294: G295-G306 [PubMed] [Google Scholar]
• Занелло Г., Меуренс Ф., Берри М., Лосось Х. (2009) Влияние Saccharomyces boulardii на желудочно-кишечные заболевания. Curr Issues Mol Biol 11: 47–58 [PubMed] [Google Scholar]

Небольшие количества диетических жирных кислот со средней цепью защищают от резистентности к инсулину при избытке калорий у людей

Abstract

Среднецепочечные жирные кислоты (СЦЖК) у грызунов были Показано, что он оказывает защитное действие на гомеостаз глюкозы во время перекармливания с высоким содержанием жиров.В этом исследовании мы исследовали, защищают ли пищевые СЦЖК от инсулинорезистентности, вызванной гиперкалорийной диетой с высоким содержанием жиров у людей. Здоровые худощавые мужчины принимали эукалорийную контрольную диету и 3-дневную гиперкалорийную диету с высоким содержанием жиров (увеличение на 75% энергии, 81–83% энергии [E%] из жира) в случайном порядке. Для одной группы ( n = 8) диета с высоким содержанием жиров была обогащена насыщенными длинноцепочечными ЖК (LCSFA-HFD), в то время как другая группа ( n = 9) принимала подобранную диету, но с ∼30 г (5E%) насыщенных MCFA (MCSFA-HFD) вместо соответствующей фракции насыщенных длинноцепочечных жирных кислот (LCFA).Гиперинсулинемико-эугликемический зажим с артериовенозным балансом бедренной кости и индикатором глюкозы применяли после контрольной и гиперкалорийной диет. В LCSFA-HFD чувствительность к инсулину всего тела и периферическое инсулино-стимулированное удаление глюкозы были снижены. Эти нарушения были предотвращены в MCSFA-HFD, сопровождались повышенным базальным окислением жирных кислот, сохранением метаболической гибкости глюкозы, повышенным неокислительным удалением глюкозы, связанным с более низким исходным содержанием гликогена, и повышенной активностью гликогенсинтазы вместе с повышенным продуцированием лактата в мышцах.В заключение следует отметить, что замена небольшого количества LCFA в рационе на MCFA восстанавливает действие инсулина в условиях липидно-индуцированного избытка энергии.

Введение

На протяжении десятилетий насыщенные жирные кислоты (ЖК) считались вредными для чувствительности к инсулину и сердечно-сосудистой системы, что отражено в диетических рекомендациях. Однако этот консенсус недавно был поставлен под сомнение (1,2), и было высказано предположение, что важно учитывать конкретный тип насыщенных ЖК (1). Насыщенные ЖК обозначаются количеством атомов углерода, а ЖК со средней длиной цепи (MCFA), такими как гексановая (C6: 0), октановая (C8: 0), каприновая (C10: 0) и лауриновая (C12: 0). ) кислоты, получили особое внимание в исследованиях метаболизма (3).Помимо присутствия в кокосовом масле и синтетических маслах триацилглицерина со средней длиной цепи (MCT), MCFA составляют 15–28% ЖК в коровьем и грудном молоке (4,5) и обогащены пальмоядровым маслом. Насыщенные длинноцепочечные ЖК (ЖКДК), такие как пальмитиновая кислота (C16: 0) и стеариновая кислота (C18: 0), обычно обогащены животным жиром, но также присутствуют в молочных продуктах. Таким образом, молочные продукты являются источником как насыщенных СЦЖК, так и ДЦЖК.

Из-за своей более низкой липофильности, MCFA в первую очередь попадают в воротную вену в неэтерифицированной форме после кишечной абсорбции (6,7).Это контрастирует с путём включения хиломикронов и лимфатической абсорбции LCFA. Следовательно, потребление триацилглицеринов (ТГ), содержащих СЦЖК, приводит к незначительному увеличению концентрации ТГ в плазме по сравнению с потреблением ТГ, богатых ДЦЖК, у людей (8). У крыс проглоченные СЦЖК преимущественно окисляются в печени (9), что позволяет предположить, что большинство СЦЖК метаболизируются там. Тем не менее, после приема пищи, которая очень обогащена СЦЖК (40% энергии [40E%]), было обнаружено, что до 17% проглоченных СЦЖК попадают в кровоток у людей (10).